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《油茶srap-pcr反应体系的建立和优化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、基因组学与应用生物学，2010年，第29卷，第6期，第1192-1199页GenomicsandAppliedBiology,2010,Vol.29,No.6,1192-1199技术改进UpgratedTechnology油茶SRAP-PCR反应体系的建立和优化孙佩光1奚如春2钮世辉1骈瑞琪2陈晓阳2*1北京林业大学生物科学与技术学院,北京,100083;2华南农业大学林学院,广州,510642*通讯作者,xychen@scau.edu.cn摘要为了建立油茶SRAP-PCR扩增体系，本研究使用单因素试验设计，对反应体系的Taq酶、
2、Mg2+、模板DNA、dNTP和引物浓度5个主要影响因子各设10个不同的水平梯度，筛选出适宜的因子范围；在此基础上，进一步采用L(45)正交设计，对影响油茶SRAP-PCR反应体系的5个因素在4水平上进行优化，建立了16油茶SRAP-PCR最佳反应体系，即25μL体积中包含模板DNA30ng，Mg2+2.8mmol/L，引物0.44μmol/L，dNTP0.2mmol/L和Taq酶1.0U。该SRAP-PCR体系的建立为油茶种质资源遗传多样性分析、品种鉴定及指纹图谱构建等研究提供了一个标准化的程序。关键词油茶,SRAP-PCR,反
3、应体系,正交设计EstablishmentandOptimizationofSRAP-PCRReactionSysteminCamelliaoleiferaSunPeiguang1XiRuchun2NiuShihui1PianRuiqi2ChenXiaoyang2*1CollegeofBiologicalSciencesandBiotechnology,BeijingForestryUniversity,Beijing,100083;2CollegeofForestry,SouthChinaAgriculturalUni-vers
4、ity,Guangzhou,510642*Correspondingauthor,xychen@scau.edu.cnDOI:10.3969/gab.029.001192AbstractForestablishtheSRAP-PCRreactionsystemforCamelliaoleifera,inthisexperiment,anoptimizationexperimentwithsinglefactordesign,whichinvolvedinfivefactorsofTaqDNApolymerase,Mg2+,prim
5、er,dNTP,andDNAtemplatewithtenconcentrationslevelseach,wasconductedtoscreentheirfeasibleconcentrationrange.Onthebasisofthis,anotheronewithorthogonaldesignofL(45)wascarriedout,andeventuallybroughtaboutan16optimizedsystemforCamelliaoleifera,whichwasasfollows:25μLvolumeof
6、reactionsystemshouldcontain30ngtemplateDNA，2.8mmol/LMg2+,0.44μmol/Leachprimer,0.2mmol/LdNTPmixtureand1.0UTaqDNApoly-merase.TheestablishmentofthisoptimalsystemforSRAP-PCRwouldbecomeoneoftheprotocolsfortheinves-tigationongeneticdiversityanalysis,cultivaridentification,a
7、ndfingerprintingofCamelliaoleifera.KeywordsCamelliaoleifera,SRAP-PCR,Reactionsystem,Orthogonaldesign油茶(Camelliaoleifera)属于山茶科(Theaceae)山科技开发,(1):103-105)。目前油茶苗的繁育主要以芽茶属(Camellia)，是我国南方重要的木本油料树种。油苗砧接为主，传统的形态鉴别方法在幼苗期很难辨茶在我国分布区域广、栽培利用历史悠久、经济价值别各品种，这就大大阻碍了油茶产业的发展。高、用途广泛，且
8、我国油茶种质资源极为丰富(庄瑞分子标记技术为油茶品种鉴定和遗传多样性分林,2008,中国林业出版社,pp.3-4)。我国油茶工作者析提供了有力的工具，其中ISSR(inter-simplesequen-通过几十年的努力，在油茶优良品种选育、组织培c
