表达CSFVE2蛋白重组AcNPV载体的构建.pdf

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1、2012。46(11)：1～5／胡刚叶，等中国兽药杂志表达CSFVE2蛋白重组AcNPV载体的构建胡刚叶，苌生科，庄金山，白朝勇，张许科(1．河南农业大学动物传染病与微生物实验室，郑州450002；2．国家兽用药品工程技术研究中心，河南洛阳471000)[收稿日期]2012—04—03【文献标识码]A[文章编号]1002—1280(2012)1l一0001-05[中图分类号]Q786[摘要】利用基因重组技术成功构建两株含猪瘟兔化弱毒株E2基因的重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)，重组病毒能够在昆虫细胞中分泌表达CSFVE2蛋白。将重组病毒注射入家蚕蛹内，于注射后第7天收获蚕蛹血淋巴

2、并进行Western—blot鉴定目的蛋白的表达。结果显示，重组病毒在家蚕蛹中成功表达了CSFVE2蛋白。本研究为进一步开发猪瘟亚单位疫苗和诊断试剂盒用抗原提供了新的途径。[关键词]猪瘟病毒；E2蛋白；AcNPV；蚕蛹ConstructionofRecombinantAcNPVExpressingCSFVE2ProteinHUGang—ye，CHANGSheng—ke，ZHUANGJin—shan，BAIChao—yong，ZHANGXu—ke，。(1．AnimalInfectiousDiseasesandMicrobiologyLaboratory，HenanAgriculturalUni

3、versity，Zhengzhou450002，China；2．NationalResearchCenterforVeterinaryMedicine，Luoyang，Henan471003，China)Abstract：Inthisstudy，weconstructedtworecombinantAcNPVs，containingCSFVE2gene，whichcouldsecreteCSFVE2proteinininfectedSf9cells．Then，therecombinantviruseswereinjectedintosilkwormchrysalisandhemolymphw

4、ascollected7daysafterinjectionforwestern—blotanalysisofCSFVE2protein．TheresultsshowedthatCSFVE2proteinwasexpressedsuccessfullyinsilkwormchrysalis．ThisworkwasexpectedtoprovideanewwayforexpressingCSFVE2protein．Keywords：CSFV；E2protein；AcNPV；silkwormchrysalis猪瘟病毒(CSFV)的E2基因编码的蛋白是引蚕蛹感染重组杆状病毒表达外源蛋白的方法成功起

5、动物机体产生保护性免疫的主要抗原蛋白。地应用于一些蛋白的表达，外源蛋白的表达量得到目前已被批准生产的猪瘟标记疫苗是Advasure@大幅提高。周耐明等利用重组的家蚕核型多角(Pfizer，UK)和PorcilisPesti~(Intervet，theNether—体病毒(BmNPV)在家蚕幼虫和蚕蛹中高效表达了lands)，二者均是以猪瘟病毒E2蛋白为基础开具有生理活性的HBsAg，表达量高达750g／蚕。发的亚单位疫苗，可以很容易通过检测其它相关抗肖庆利等利用重组的BmNPV在家蚕幼虫中高效体来区别免疫猪和感染猪。表达了禽马立克氏病毒糖蛋白B抗原，每1mL蚕杆状病毒表达系统是一种高效的真核

6、表达系血淋巴表达量可达1mg。统，能够有效进行蛋白质的翻译后加工，如转运、分本文利用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒泌、糖基化、脂酰基化等，其表达的外源蛋白结构与(AcNPV)Bac—to—Bac表达系统构建了含有天然蛋白结构非常接近。近年来，通过家蚕幼虫和CSFVE2基因的重组AcNPV。重组病毒感染昆虫作者简介：胡刚叶，在读硕士研究生，从事新型兽用生物制品的研究。通讯作者：白朝勇。E—mail：chybm63vp@yahoo．tom．cn中国兽药杂志2012，46(11)：1～5／胡刚叶，等细胞后通过分泌途径产生重组CSFVE2蛋白，在家(5u)，反转录酶Buffer4p,L，总体系为20L，

7、在蚕蛹中亦成功表达出CSFVE2蛋白。PCR仪中进行42℃作用1h。然后在进行PCR反1材料与方法应，PCR反应总体系为50tzL：cDNA模板3，上1．1材料猪瘟活疫苗购自哈尔滨维科生物技术开下游引物各(10pmoL／L)1L，dNTP4IxL(2．5发公司(生产批号：2010005)；AcNPVBac—to—Bacmmol／L)，高保真DNA聚合酶1L，高保真DNA表达系统试剂盒、pFastBacHBM—