蓖麻蚕核型多角体病毒基因gp64的克隆及荧光定量表达分析.pdf

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1、第36卷第6期河北农业大学学报VoI．36NO．62013年11月JOURNALOFAGRICULTURALUNIVERSITY0FHEBEINOV．20I3文章编号：1000—1573(2013)06—0076一O7蓖麻蚕核型多角体病毒基因gp64的克隆及荧光定量表达分析钱荷英h，徐安英9张月华孙平江h，高坤’郭锡杰(1．江苏科技大学，江苏镇江212003；2．中国农业科学院蚕业研究所，江苏镇江212018)摘要：Gp64是杆状病毒CRV(Cell-releasedvirus)的主要囊膜蛋白，在C

2、RV借吸附和内吞作用侵入细胞过程中起关键作用，能促进CRV囊膜与胞饮体膜之间的融合从而促进杆状病毒对宿主细胞的吸附。本试验克隆了蓖麻蚕核型多角体病毒(Philosamiacynthiaricininuclearpolyhedrosisvirus，PcrNPV)的gp64基因，序列分析表明该基因ORF全长1530bp，编码509个氨基酸残基，其相应的GP64蛋白质分子量为58．46kD，等电点为5．59；同源性分析表明，PerNPV的GP64蛋白与柞蚕核型多角体病毒(Antheraeapernyinu

3、clearpolyhedrosisvi—rus，ApNPV)的GP64同源性高达99，而与家蚕核型多角体病毒(Bombyxmorinuclearpolyhydrosisvirus，BmN-PV)的GP64仅为76；荧光定量分析表明，PcrNPV的gp64基因在不同蓖麻蚕品种的中肠、血液及其脂肪体中均有相同的增殖趋势，但在不同品种的各组织中的增殖量不同，增殖量多的品种与感染试验中相对易感的品种一致。关键词：蓖麻蚕核型多角体病毒；gp64；基因克隆；荧光定量PCR中圈分类号：S685．26文献标志码：A

4、CloningandexpressionalanalysisbyfluorescentquantitativePCRofPhilosamiacynthiaricininuclearpolyhedrosisvirusgQIANHe-ying，XUAn-ying，ZHANGYue-hua，SUNPing-jiang，GAOKun，GUOXi-iie(1．JiangsuUniversityofScienceandTechnology，Zhenjiang212018，China,2．TheSericultu

5、ralResearchInstituteofChineseAcademyofAgriculturalSciences，Zhenjiang212013，China)Abstract：GP64iSthemajorenvelopemembraneproteinofthecellreleasedvirus(CRV)，andplayflkeyroleinpenetratingacellofCRVduringendocytosisandadsorption．Thegpe4inPcrNPVwascloned，an

6、ditsORFcontains1530bpandencodesaproteinof509aminoacidresidueswithacalculatedmolecularweightof58．46kDandisoelectricpointof5．59．Theho—mologyanalysisofthegp64genesequencesindicatedthatthededucedaminoacidsequenceofPcrNPVsharedhomologyof99and76withApNPVandB

7、mNPV，respectively．Real-timequantitativeRT—PCRresultsindicatedthatthetrendsofexpressionofGP64inmidgut，bloodandfatbodyofdifferentvarietiesweresimilar，buttherelativeamountofexpressionindiffer—enttissueswasdifferent．Thevarietywhichshowedhigherexpressionwas

8、consistentwiththemoresusceptivevarietyintheexperiments．Keywords：Philosamiacynhtiaricininuclearpolyhedrosisvirus；g4；genecloning；fluores—centquantitativePCR收稿日期：2013一O6—20基金项目：国家基础研究计划(2O12CB114600)．作者简介：钱荷英(1971一)，女，副研究员．E-mail：qianheyin