热刺激介导兔关节软骨细胞凋亡的实验研究.pdf

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1、实用骨科杂志第20卷，第1期，2014年2月厘文章编号：1008—5572(2014)02—0133—04热刺激介导兔关节软骨细胞凋亡的实验研究张振雨，叶伟，王军义，卢延霆，陈辉(1．河南省濮阳市人民医院骨科，河南濮阳457000；2．中山大学附属第二医院骨科，广东广州510120)摘要：目的研究体外培养的兔关节软骨细胞对热刺激的反应。方法取兔关节软骨细胞在37~C培养24h，然后在48％的水浴箱中孵育10min，之后在37℃培养箱中培养2周；热刺激后，用tunel检测法分别检测第0．5h、1h、3h、和5h关节软骨细胞凋亡的情况；用电

2、子显微镜分析证实软骨骨细胞在形态学上凋亡的特性；用免疫组化染色法显示caspase一3活性随细胞凋亡增加的改变。结果形态学和生物化学上的证据提示48％热刺激10min导致体外关节软骨细胞凋亡加速。结论这项研究显示热刺激是软骨细凋亡的因素，并为选择杀死骨关节恶性肿瘤细胞、最小限度损伤关节软骨细胞提供了基础温度指导。关键词：热刺激；关节软骨；关节软骨细胞凋亡中图分类号：R322．71文献标识码：ATheExperimentalStudyofApoptosisofArticularChondrocytesInducedbyHeatShockZ

3、HANGZhen—yu。YEWei，WANGJun—yi。，etal，(1．DepartmentofOrthopedics，thePeople’SHospitalofPuyang，Puyang457000，China；2．DepartmentofOrthopedics，theSecondAffiliatedHospitalofSunYat—senUniversity，Guangzhou510120，China)Abstract：ObjectiveToinvestigatedcellularandmatrixresponsesofarti

4、cularcartilagetoheatshock．MethodsRabbitarticularcartilagewaspretreatedat37。Cfor24hbeforebeingexposedto48。Cfor10minandsubsequentlyincubatedat37。Cfor14days．Followingheatshock．aterminaldeoxvnucleotidvltransferasenickendlabelingassayshowedthatarticularchon—drocyteapoptosisap

5、pearedathalfhour，1hour，3hourand5hour；Analysisbytransmissionelectronmicroscopyconfirmedthatthechondrocyteshadcharacteristicmorphologicalfeaturesofapoptosis；immunohistochemicalstainingrevealedthatcaspase一3activityinchondrocytesincreased．ResultsMorphologicalandbiochemicalev

6、idencefromthisstudysuggestedthatheatshockat48。Cinducedarticularchondrocyteapoptosisofarticularcartilageinvitro．ConclusionThisstudythusprovidesevidenceoftheonsetofosteoarthritisinducedbyheatshockandabasisforchoosingatemperatureatwhichmalignantbonetumorcellscanbekilledwith

7、minimaldamagetoarticularcartilage．Keywords：heatshock；articularcartilage；chondrocyteapoptosis热刺激疗法是杀死恶性骨肿瘤细胞一种有效方便的方1资料与方法法。这种方法曾被报道，用巴斯消毒液在60℃30min可以1．1关节软骨细胞的获取与分离新西兰大白兔4只，未杀死肿瘤细胞并且被处理的骨的机械强度几乎与新鲜骨一分雌雄，体重2—2．5，备皮后，空气栓塞处死。术野碘伏样J，此外，临床上的调查显示用这种方法进行骨骼重建取消毒、铺无菌手术巾后取出关节软骨。放入

8、无菌取材盒内，得了很好的效果。转移到超净台操作。小心剪碎软骨，放人盛有无血清培养基当用微波介导的热疗法处理膝关节附近恶性骨肿瘤时，的培养皿中，用含有50mL庆大霉素及100g／mL制霉也能损伤骺板_3J，在