叶酸偶联磁性白蛋白纳米球的体内外靶向性评价.pdf

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1、波谱学杂志第30卷第4期Vo1．30NO．42013年12月ChineseJournalofMagneticResonanceDec．2013文章编号：1000—4556(2013)04—499—08叶酸偶联磁性白蛋白纳米球的体内外靶向性评价唐秋莎，安艳丽。，杨蕊(1．东南大学医学院病理与病理生理学系，江苏南京210009；2．东南大学医学院，江苏省分子影像与功能影像重点实验室，江苏南京210009)摘要：该文从体内外水平，探讨叶酸偶联磁性白蛋白纳米球对人鼻咽癌细胞KB的靶向效应．体外实验中，将叶酸靶向、非叶酸靶向和叶酸抑制组与人鼻咽癌细胞KB共孵育24h后，

2、通过普鲁士蓝染色、7．0TeslaMicro—MR仪检测叶酸受体介导的靶向效应；体内试验中，首先建立裸鼠荷人鼻咽癌细胞KB皮下移植瘤动物模型，再通过MRI检测及病理组织学检查，评价叶酸偶联磁性白蛋白纳米球的靶向性．体外MRI成像显示叶酸靶向组与人鼻咽癌细胞KB共孵育后wI信号强度降低，普鲁士蓝染色则显示靶向组细胞内存在大量铁颗粒；在体MRI成像结果显示，注射材料后不同时间点叶酸靶向组的TwI、wI强度有明显下降，具有统计学差异．病理学检查显示叶酸靶向组肿瘤组织内有较多蓝染的铁颗粒，而非靶向组和叶酸抑制组则未见铁颗粒的存在．体内外实验均表明叶酸偶联磁性白蛋白纳米

3、球对人鼻咽癌细胞KB具有良好的靶向性．关键词：磁共振成像(MRI)；靶向成像；叶酸；癌中图分类号：0482．53文献标识码：A引言近年来，磁共振靶向成像在肿瘤的诊断治疗中得到广泛应用．叶酸受体(FR)在部分人体肿瘤如鼻咽癌、卵巢癌、乳腺癌、宫颈癌、胶质瘤、肺癌、结直肠癌和肾细胞癌等细胞表面都有过量表达，而在正常组织的表达又高度保守，因此利用FR进行肿瘤特异收稿日期：2013-06—18；收修改稿日期：2013-0716基金项目：国家自然科学基金资助项目(81071881)．作者简介：唐秋莎(1971一)，女，江苏南京人，博士，副教授，影像医学与核医学专业．电话

4、：02583272373，Emailpanyixitqs@163．com．*通讯联系人．5O0波谱学杂志第30卷性显像和治疗受到广泛关注_．在前期研究中，我们已采用无毒、生物可降解的天然高分子材料牛血清白蛋白成功制备叶酸受体偶联的磁性白蛋白纳米球(叶酸～磁性白蛋白纳米球)．考虑到纳米级四氧化三铁是一种新型MRI对比剂，主要产生T。负性对比效应，因此本研究利用磁共振技术探讨自制的叶酸一磁性白蛋白纳米球的靶向性，为进一步探讨其在肿瘤诊疗中的作用奠定基础．1实验部分1．1实验仪器和材料主要试剂：叶酸一磁性白蛋白纳米球、磁性白蛋白纳米球(自制)，人鼻咽癌细胞KB(中科

5、院上海细胞研究所)，无叶酸RPMI1640细胞培养液(Gibco公司)，胎牛血清(Gib—CO公司)，0．25胰酶(Sigma公司)，叶酸(TCI公司)，Babl／cnu／nu裸小鼠(中科院上海莱克斯实验动物中心)．主要设备：倒置相差显微镜(带荧光)(Axiovert25，德国Zeiss公司)，正置荧光显微镜(ImaginerA1，德国Zeiss公司)，7．0TMRI成像设备(Phar—maScan，德国Bruker公司)，石蜡切片机(德国Leica公司)．1．2实验方法1．2．1肿瘤细胞培养人鼻咽癌细胞株KB接种于含10胎牛血清的RPMI1640培养液中，在

6、37。C，饱和湿度5CO的培养箱中培养，每2～3天传代一次，使细胞处于贴壁状态．使用前一天，将处于对数生长期的该细胞用无叶酸RPM11640培养基洗涤3次，并用该培养基继续培养24h．1．2．2普鲁士蓝染色取对数生长期的人鼻咽癌细胞KB接种于24孔板中，每孔约含细胞3×1O，24h细胞贴壁后，将叶酸靶向(叶酸一磁性白蛋白纳米球)、非叶酸靶向(磁性白蛋白纳米球)和叶酸抑制组[叶酸一磁性白蛋白纳米球+叶酸(1retool／L)]复合纳米球与人鼻咽癌细胞KB共孵育24h后，通过普鲁士蓝染色观察人鼻咽癌细胞KB内含铁的情况．普鲁士蓝染色步骤如下：①拿出24孔板，倒掉培

7、养液，PBS洗3遍；②lO甲醛固定30min，PBS洗3遍；③取4亚铁氰化钾水溶液和4盐酸水溶液等份混合，滴在切片上，37。C培养箱孵育30min；④PBS洗3遍，倒置相差显微镜观察拍照．1．2．3体外MRI扫描取对数生长期的人鼻咽癌细胞KB接种于6孔板中，每孔约含细胞1×10，24h细胞贴壁后，将叶酸靶向(叶酸磁性白蛋白纳米球)、非叶酸靶向(磁性白蛋白纳米球)和叶酸抑制组[叶酸一磁性白蛋白纳米球+叶酸(1retool／L)]复合纳米球分别与人鼻咽癌细胞KB共孵育24h后，用0．25胰蛋白酶消化后收集、离心，重悬于0．5mL，1琼脂糖的Eppendof管中，另

8、取1个Eppendof管内为琼脂糖作为