叶酸偶联5氟尿嘧啶白蛋白对肿瘤细胞的毒性及靶向性研究.doc

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1、叶酸偶联5氟尿嘧啶白蛋白对肿瘤细胞的毒性及靶向性研究作者：张武雄，凌丽，何练芹，臧林泉，潘雪刁，朱亮【摘要】目的研究叶酸偶联5氟尿嘧啶白蛋白在体外对肿瘤细胞的毒性及经叶酸受体介导的靶向性。方法选用叶酸受体表达阳性FR(+)宫颈癌HeLa细胞及叶酸受体表迗阴性FR(-)肺癌A549细胞进行实验。用MTT法观察叶酸偶联物对细胞的毒性作用，同时利用游离叶酸能与叶酸偶联物竞争性结合叶酸受体的原理，考察叶酸偶联物是否具有经叶酸受体介导的靶向性。结果叶酸偶联物对FR(+)HeLa细胞具有比5氟尿嘧啶原料药更高的抑制率，能有效的靶向FR(+)

2、HeLa细胞，且细胞毒性作用能被过量的外源性游离叶酸所抑制，而叶酸偶联物对FR(-)A549细胞作用很弱。结论叶酸偶联的5氟尿嘧啶白蛋白能经叶酸受体介导靶向于叶酸受体丰富的肿瘤细胞。【关键词】叶酸偶联;5氟尿嘧啶；细胞毒性；靶向性Abstract：ObjectiveTostudythecytotoxicityandtargetingabilityoffolateconjugated5fluorouracilalbuminviafolatereceptormediatedendocytosisontumorcellsinThefo

3、latereceptorpositiveFR(+)HeLacellandFR()lungA549cellwereusedforexperiment.Thecytotoxicityofthefolatey.Accordingtotheconprincipleandduetoighaffinityforfolaicacidwasusedtovalmpetitiveinhibitiothatfreefolatehadhtereceptor,freefolidatewhetherfolateconjugatehasthetargetin

4、gabilitytoFR(+)HeLacellviafoladThecytotoxicityofFR(+)HeLacellwassturacilcrudedrugintn,andcouldbeinhibiicacid,whilethecyttereceptorfolaterongerthan5mediateconjugatetofluorohesameconcentratiotedbyexcessfreefolotoxicityonFR(-)lungA549cellwasveryweak.ConclusionFolateconj

5、ugated5fluorouracilalbumincouldbetargetedintotumorcellswithrichfolatereceptorsviafolatereceptormediatedendocytosissignificantly.Keywords：folateconjugated；5fluorouracil；cytotoxicity；targeting目前，肿瘤细胞叶酸受体受到广泛关注，已成为肿瘤诊断和治疗研究的新靶点［1-4］。国内外研究都证明了利用叶酸对受体的高度亲和性，可将药物-叶酸偶联物经叶酸受

6、体介导靶向到高度表达该受体的肿瘤细胞（如鼻咽癌、宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌等），这些肿瘤细胞膜表面上的叶酸受体活性和数量显著高于一般正常细胞［5-8］，这为叶酸受体介导药物靶向于肿瘤细胞的研究奠定了基础。据此，本研究以叶酸为靶向基团合成了叶酸偶联的5氟尿嘧嚏白蛋白，采用MTT法［9］观察叶酸偶联物对肿瘤细胞的毒性作用，利用游离叶酸能与叶酸偶联物竞争性结合叶酸受体的原理，验证该叶酸偶联物是否具有经叶酸受体介导的靶向性。1实验仪器与材料实验仪器SWTJ水平流净化工作台（苏州市净化设备总厂）；Model680型酶联免疫检测仪（美国BioR

7、adLaboratories）；HY5回旋式振荡器（江苏省金坛市宏华仪器厂）；DK8D型电热恒温水槽（上海一恒科技有限公司）；倒置相差显微镜（德国LEicaDMIL）;培养箱（ThermoForma371）；SZ93自动双重纯水蒸榴器（上海雅荣生化设备仪器有限公司）。实验材料宫颈癌HeLa细胞、肺癌A549细胞（本院药理教研室保存）；MTT（ThiazolylBlue噻唑兰，Sigma分装，北京鼎国生物技术有限责任公司）；RPMI1640培养液（吉诺生物医药技术有限公司）；RPMIMedium1640无叶酸培养基（CIBCO）;

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