临床医学论文-反义寡核苷酸抑制大鼠损伤视神经Nogo-A mRNA的表达.doc

《临床医学论文-反义寡核苷酸抑制大鼠损伤视神经Nogo-A mRNA的表达.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、临床医学论文.反义寡核昔酸抑制大鼠损伤视神经Nogo-AmRNA的表达作者：袁容娣叶剑彭锡嘉刘少章【摘要】目的：观察反义寡核昔酸对损伤视神经Nogo-A的影响。方法：实验分为对照组、随机序列组、和2,5,lOumol/L3种Nogo.A反义寡核昔酸浓度组。大鼠视神经钳夹伤后，采用逆转录■聚合酶链反应法（RT・PCR），半定量分析反义寡核昔酸对损伤视神经Nogo-AmRNA表达量的变化。结果：反义寡核苜•酸均显着降低Nogo-AmRNA的表达（P<0.01），随机序列对Nogo-AmRNA的表达无影响（P>0.05）o结论：反义寡核甘酸对视神经损伤后Nogo-AmRNA表达有抑制作用

2、。【关键词】反义寡核甘酸Nogo-A视神经创伤RT-PCREffectsofantisenseoligodeoxynucleotidesonNogo-AmRNAexpressionininjuredopticnervesAbstractAIM:Toobservetheeffectsofantisenseoligodeoxynucleotides(ASODN)onNogo-AmRNAexpressionininjuredopticnerves.METHODS:Atotalof30ratsweredividedintofivegroups:controlgroup,randomsequ

3、encegroupandtestgroups(2umol/L,5umol/Land10umol/LNogo-Aantisenseoligodeoxynucleotides).reversetranscriptasc-polymcrascchainreaction(RT-PCR)methodwasusedinthedetectionofthelevelsofNogo-AmRNAininjuredopticnerves.RESULTS:ThercsultofRT-PCRshowedthatNogo-Aantisenseoligodcoxynuclcotidescouldsignific

4、antlyinhibittheexpressonofNogo-AmRNA(P<0-01),randomsequenceantisenseoligodeoxynucleotideshadnonoticeableeffectonNogo-AmRNA.CONCLUSION:Nogo-AantisenseoligodcoxynuclcotidescaninhibiItheexpressonofNogo-AmRNAininjuredopticnerves.•KEYWORDS:antisenseoligodeoxynucleotides;Nogo-A;opticnerve;injury;rev

5、erseIranscriplase-polymerasechainreaction0引言视神经损伤是临床常见的眼外伤，迄今仍缺乏有效的治疗手段。研究证实，微环境中存在神经生长抑制因子是成年中枢神经再生能力低下的原因之一，中和或减少神经生长抑制因子可以促进成年哺乳动物RGCs轴突再生。Nogo-A是最具特征性的神经生长抑制因子。2000年美国、英国、瑞士的3个实验室［1-3］同时报道Nogo基因成功克隆,它编码3种蛋白(Nogo・A,・B,・C)。Nogo-A具有最强的神经生长抑制作用，其抗体IN-1可以中和这种抑制作用。研究表明［4］,反义寡核昔酸对培养的视神经少突胶质细胞Nogo

6、-A的表达具有抑制作用，我们通过在体实验研究反义寡核甘酸对损伤视神经Nogo-A表达的影响。1材料和方法1.1材料8-10wkWistar雄性大鼠30只，体质量200〜250g,由第三军医大学大坪医院野战外科研究所实验动物中心提供，分为实验组、随机序列组及对照组，每组6只，3个实验组分别用2,5,lOumol/L反义寡核昔酸10pL球后注射，对照组用注射用水lOuLo硫代反义寡核昔酸序列为5-TGCTTTCGGTTGCTGAGGTA-3,浓度定为2501/L；同时设计一段随机序列，其序列为5-GCAGACCAGCGCGGAGCT-3o经基因库检索，Nogo・A反义核酸片段仅与Nog

7、o-A有同源性，而随机序列同所有基因均无同源性。由大连Takara公司进行全硫代修饰（高纯度级）。1.2方法10g/L戊巴比妥钠0.8mL（30mg/kg）ip麻醉，暴露视神经,在球后2mm处用动脉夹夹持视神经40s,致伤后按以上分组分别球后注射不同浓度的反义寡核昔酸或注射用水，隔24h给药1次，共2次。伤后3d,断颈处死大鼠，取伤侧视神经置于组织研磨器中研磨匀浆，・70°C冻存备用。采用Trizol试剂提取视神经总RNA。用DU-640型紫外分光光度计进行定量。引物