大鼠酒精性肝损伤中pparα mrna表达与氧

大鼠酒精性肝损伤中pparα mrna表达与氧

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1、大鼠酒精性肝损伤中PPARαmRNA表达与氧【摘要】目的观察大鼠酒精性肝损伤肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)mRNA表达变化与氧化应激的关系,探讨PPARα在酒精性肝损伤中的作用。方法将60只DA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,并分析PPARαmRNA的表达与FFA水平、MDA含量、SOD活力之间的相关性。结果与对照组比较,各观察组大鼠PPARα的表达受抑制;随造模时间延长,其表达水平呈进行性降低,特别是在12、16RNA表达与血清FFA水平、肝组织中MDA含量之间呈负相关(P<0.05),与肝组织中SOD活力呈正相关(P<0

2、.05)。结论PPARα表达与氧化应激关系密切,在酒精性肝损伤进程中具有重要作用。【关键词】过氧化物酶体增殖物激活受体αmRNA;氧化应激;酒精性肝损伤过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)是一类由配体激活的核转录因子,活化后可以调控多种核内靶基因的表达,具有多种生物学效应〔1〕。研究发现,作为PPARs亚型之一,PPARα具有调节脂肪代谢、炎症反应、免疫功能、细胞分化等作用,与诸多肝脏疾病的发生、发展关系密切。笔者已研究证实,PPARα表达与核因子(NF)κB、肿瘤坏死因子(TNF)α、白介素(IL)6等多种炎性细胞因子关系密切,在酒精性肝损伤

3、炎症反应中具有重要作用〔2〕。本实验将从PPARαmRNA表达与氧化应激的关系入手,进一步探讨PPARαmRNA的表达在酒精性肝损伤发病机制中的作用。1材料与方法1.1实验动物分组健康DA含量和SOD活力。以上均严格按照试剂盒(南京建成生物工程公司提供)操作说明操作。按照总RNA提取试剂盒(美国BBI公司产品)操作说明提取总RNA,经变性琼脂糖电泳法检测其完整性,以随机引物(由沈阳联星生物技术有限公司设计合成并纯化,见表1)逆转录合成cDNA,分别以适量cDNA为模板进行PCR扩增反应。表1目的基因引物序列及反应条件反应参数:95℃预变性2min,然后95℃

4、变性30s,59℃退火30s,72℃延伸1min,共30个循环,反应结束前72℃加时延伸5min。PCR产物在2%琼脂糖凝胶上80V恒压电泳2h,经凝胶成像系统分析成像,以βactin为内参照,目的基因PPARα与βactin的条带光密度比值(IOD)作为PPARαmRNA的相对量进行比较分析。1.5统计学处理采用SPSS11.5统计软件包,计量资料采用组间t检验(方差不齐时用t’检验),等级资料用秩和检验,计数资料用χ2检验。2结果实验过程中,观察组大鼠因灌胃误入气管或胃穿孔(经解剖证实)共死亡10只,其中4、12DA、SOD变化见表3。①随造模时间延

5、长,观察组大鼠肝组织中MDA含量逐渐增加,造模8DA含量及SOD活力2.3RTPCR结果琼脂糖凝胶电泳在646bp、353bp处显示出PPARα、βaction阳性电泳带(图1)。M:DNAMarker;A:对照组;B:4DA含量、血清FFA水平之间均存在良好的效应关系,呈负相关(P<0.01,P<0.05);而PPARα的基因表达与肝组织中SOD活力呈正相关(P<0.05)。表4各组大鼠肝组织中PPARαmRNA的表达表5PPARα的表达与氧化/抗氧化指标相关性分析3讨论酒精性肝损伤致病因素单一(即长期大量的酒精摄入),但其确切的发病机制却较为复杂

6、,目前尚未完全明确。近年来,氧化应激在酒精性肝损伤中的重要作用已得到普遍公认。自由基引起的氧化应激反应是诱发肝损伤的重要原因〔4〕。作为氧化应激的主要分解产物,FFA具有很强的细胞毒性,破坏细胞膜、线粒体和溶酶体膜等引起细胞内微器官损伤,而且还能明显加强细胞因子的毒性,导致肝实质变性、炎性细胞浸润和纤维化等改变〔5〕;而MDA与蛋白质结合形成的加合物,可以激活机体的免疫反应而导致肝损害〔6〕。作为体内重要的抗氧化酶,SOD能清除超氧阴离子自由基,减少脂质过氧化反应,使机体细胞和组织免受损伤,对机体的氧化和抗氧化平衡起着重要作用,是体内重要的保护细胞因子。酒精及其

7、代谢产物可激活O2产生大量自由基,促发并加重氧化应激,减弱机体抗过氧化能力,氧化应激产物增加,使肝脏在酒精第一次打击的基础上遭受第二次打击,促使酒精性肝损伤的发生及发展。本实验发现,在酒精性肝损伤的不同时间段,血清FFA水平、肝组织中MDA含量随造模时间延长逐渐增高,肝组织中SOD活力逐渐下降;而PPARαmRNA表达受抑制,随造模时间延长逐渐明显,且与血清FFA水平、肝组织中MDA含量之间呈负相关,与肝组织中SOD活力呈正相关。提示,酒精可促发并加重氧化应激,降低机体清除自由基及抗过氧化能力,体内过氧化产物增多,从而促进酒精性肝损伤的发生与发展;而PPAR

8、αmRNA与氧化应激关系

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