pparα在老年大鼠酒精性肝损伤脂质过氧化中的

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1、PPARα在老年大鼠酒精性肝损伤脂质过氧化中的【摘要】　　目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)在老年酒精性肝损伤中的作用。方法将60只DA含量、SOD活力测定　　取制备好的肝组织匀浆，严格按照MDA、SOD测试试剂盒（南京建成生物工程公司提供）说明进行操作。　　1.6RTPCR　　总RNA提取试剂盒(美国BBI公司产品)；RTPCR试剂盒(日本TaKaRaBiotech公司产品)；PCR引物经Primer5.0软件设计，由沈阳联星生物技术有限公司合成并纯化，见表1。表1目的基因引物序列及反应

2、条件(略)肝组织总RNA严格按照总RNA提取试剂盒操作说明进行提取，变性琼脂糖电泳法检测RNA的完整性，以随机引物逆转录合成cDNA，-80℃冰箱保存备用。根据RTPCR试剂盒要求加入相应成分，构成反应体系。将反应体系放于RTPCR仪中进行扩增反应，RTPCR反应参数：94℃预变性10s，然后94℃变性15s，62℃退火及聚合1min，共45个循环。在每个循环进行到62℃时进行荧光定量检测。反应完毕后，采用2%琼脂糖电泳检测产物的单一性。每组实验至少平行重复2～3次。选取2～6循环作为基线范围，值为0.8时作

3、为阈值，得到各个RTPCR扩增反应的CT值，最后采用△△CT法计算公式得到观察组各组与正常组之间mRNA表达量的相对比值。　　相对含量%＝2－△△CT△△CT＝△CT待测样品-△CT对照样品　　1.7统计学处理　　采用SPSS12.0统计软件包，计量资料组间比较采用q检验，相关性采用直线回归分析。　　2结果　　2.1一般状况　　实验过程中，观察组大鼠因灌胃误入气管或胃穿孔（经解剖证实）共死亡10只，其中4、8RNA表达　　见表3。随造模时间的延长，观察组各组大鼠肝组织中PPARα的基因表达（相对比值）逐渐减弱，

4、与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01），其中造模12、16DA含量、SOD活力的相关性分析　　见表4。观察组中各组大鼠PPARα的基因表达与血清FFA水平之间均存在良好的效应关系，呈负相关。观察组中各组大鼠PPARα的基因表达与肝组织中MDA含量之间均存在良好的效应关系，呈负相关；而PPARα的基因表达与肝组织中SOD活力呈正相关。表4PPARα的基因表达与血清FFA水平相关性分析（略）　　3讨论酒精性肝损伤的致病因素单一明确，即长期大量的酒精摄入，但发病机制较为复杂，可能与

5、酒精及其代谢产物的毒性作用、氧化应激、免疫介导和细胞因子、细胞凋亡、内毒素等多种因素有关〔3〕。目前，氧化应激与脂质过氧化在酒精性肝损伤发病机制中的作用备受关注，是酒精诱导肝细胞损伤的主要作用机制之一〔4，5〕。酒精在肝细胞内可通过细胞色素CYP4502E1并在铁离子参与下产生氧化作用，生成大量自由基，激活磷脂酶及脂质过氧化反应，降低膜磷脂，改变其通透性和流动性，从而改变与膜结合的酶、受体和离子通道的微环境，影响其功能〔6〕。此外，脂质过氧化还可以影响DNA和蛋白质的结构及功能〔7〕。近年来研究证实，PPARα表

6、达减少可以使肝脏中脂质的利用和脂肪酸的氧化均发生障碍，导致肝脏内脂肪蓄积〔8〕。酒精可以使大鼠肝脏出现脂肪变性和炎症反应，同时PPARα所调控的肝脂肪酸结合蛋白基因表达下降，而PPARα激动剂可以改善脂肪变性、逆转炎症、上调相关基因的表达〔9〕。提示PPARα的表达与氧化应激及脂质过氧化关系密切，在酒精性肝损伤中具有重要作用。　　本实验发现随造模时间的延长，血清FFA水平、肝组织中MDA含量逐渐升高，而肝组织中SOD活力逐渐减弱，进一步证实氧化应激与脂质过氧化在酒精性肝损伤中具有重要作用，与其他学者研究结论相

7、一致〔4，5〕。同时，经RTPCR方法证实PPARα在酒精性肝损伤中表达受抑，随造模时间延长其表达水平进行性降低，且表达水平与血清FFA水平、肝组织中MDA含量呈负相关，与肝组织中SOD活力呈正相关。结合以往实验研究结论，笔者认为氧化应激与脂质过氧化在酒精性肝损伤中具有重要作用，特别在老年性酒精性肝损伤中其作用更为明显。同时，PPARα参与了酒精性肝损伤，并在其病理过程中具有重要作用。PPARα的表达受抑，不仅可以使NFκB活化，启动多种炎性细胞因子的过量表达，放大炎症反应，促进酒精性肝损伤的发生和发展〔

8、1〕；同时，也可能引起一系列与肝内脂肪酸代谢有关的蛋白质、酶基因的转录水平降低，使脂肪酸在肝脏内的氧化减少，脂蛋白合成代谢障碍，肝细胞内出现脂肪沉积及炎症反应，从而导致酒精性肝损伤的发生和发展。但PPARα参与氧化应激及脂质过氧化确切的作用途径、机制尚未完全明确，有待于进一步研究。【