钙池操纵的钙通道在乙醇诱导HepG2细胞钙超载中的作用.pdf

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1、中华肝脏病杂志2013年l2月第2l卷第l2期ChinJHepatol，December2013，Vo1．21，No．12949·钙池操纵的钙通道在乙醇诱导HepG2细胞钙超载中的作用刘慧敏阎立惠罗争孙晓萌崔瑞冰李学会阎明【摘要】目的研究乙醇诱导肝细胞钙超载的机制及钙池操纵的钙离子通道(SO~s)在其中的作用。方法使用浓度梯度的乙醇处理HepG2细胞，并观察细胞外钙离子螯合剂乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)及SOCs抑制剂2一APB对200umol／L乙醇刺激的干预效应。实验分为：(1)正常对照组：磷酸盐缓冲液刺激；(2)乙醇慢性刺激组：分别给予25、50、100

2、、200、400、800mol／L乙醇，刺激24h或200mol／L乙醇，刺激24、48、72h；(3)EGTA处理组：200mol／L乙醇+0．5mol／LEGTA，刺激24h；(4)2-APB处理组：200“mol／L乙醇+50“mol／L2-APB，刺激24h。细胞计数CCK8试剂盒检测细胞存活率；全自动生物化学分析仪检测HepG2细胞培养上清液ALT、AST漏出量；流式细胞仪检测HepG2细胞胞浆ca浓度。荧光定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法检测HepG2细胞中SOCs通道蛋白分子间质相互作用因子l及钙释放激活钙通道蛋白1的基因及蛋白表达。各组间均数的比较采用

3、单因素方差分析或独立样本t检验。结果50、100、200、400、800mot／L乙醇刺激24h使HepG2细胞的存活率分别降低为97．3％士2．9％、83．4％士3．3％、67．8％士4．4％、37．5％±3．o％、14．1％土4．9％，组间比较，，：99．945，P<0．01，细胞存活率呈浓度依赣l生；细胞培养基上清液ALT漏出量分别增加为(14．2-4-2．8)、(17．7±3．2)、(20．0±2．6)、(21．6±1．3)、(24．9土1．7)U／L，组间比较，F=15．286，尸<0．01；AST漏出量分别增加为(72．0土4．7)、(91．6±7．4)

4、、(107．3土11．4)、(116．5士13．4)、(128．9±7．1)u／L，组间比较，，=39．674，尸<0．01l使HepG2细胞的[Ca2+】i水平分别增高为正常对照组的(1．3±0．4)、(1．3±0．2)、(1．44-0．2)、(2．34-0．3)、(2．64-0．2)倍，F=56．978，P<0．01。EGTA、2-APB干预使200mol／L乙醇刺激后的HepG2细胞[Ca抖】i水平分别降至正常对照组的(1．8士0．2)倍和(1．9±0．1)倍，值分别为7．201和8．183，尸值均<0．01}同时将乙醇刺激后的细胞存活率分别增高至82．2％±

5、3．9％和78．6％4-1．5％，f值分别为6．692和6．124，尸值均<0．01)；使细胞培养基上清液ALT漏出量分别降低至(16．44-2．0)U／L和(17．2±1．9)U／L，f值分别为7．145和6．352，尸值均<0．01}AST漏出量分别降低至(86．4±8．8)U／L和(88．34-6．3)U／L，t值分别为9．337和8．704，P值均<0．01。200mol／L乙醇刺激明显增加HepG2细胞STIM1及Orail的基因及蛋白表达量，且其表达增加持续至少72h。结论乙醇增高SOCs通道蛋白分子表达，增加SOCs介导的ca内流，提示此可能是乙醇导致

6、肝细胞[Ca2l增高及相关肝细胞损伤的重要分子机制。【关键词】肝疾病，酒精陛；HepG2细胞；钙池操纵的钙离子通道Roleofstore-operatedCa2+channelsinethanol-inducedintraceHularcd~increaseinHepG2cellsLIUHui-min*YANLi．hui,LUOZheng,SUNXiao—meng,CU1Rui—bing,LIXue—huLYANMing．*DepartmentofGastroenterology,QiluHospital,ShandongUniversity,Jinan,25001

7、2ChinaCorrespondenceauthor．"YANMing,Emaihymylh@163．comCo．correspondenceauthor．"LIXue—hugEmail．"lxh手r@163．comD0I：10．3760／cma．J．issn．1007—3418．2013．12．015基金项目：山东省自然基金项目(ZR2oo9CM024)作者单位：250012济南，山东大学医学院山东大学齐鲁医院消化内科【刘慧敏(第一作者现在烟台毓璜顶医院消化内科)、罗争、孙晓萌、崔瑞冰、李学会、阎明】，山东师范大学(阎立惠)刘慧敏女，3l岁，博士。通信作者：阎