钙池操纵的钙离子通道在乙醇诱导的原代肝细胞钙超载及损伤中的作用.pdf

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1、860·中华肝脏病杂志2013年l1月第21卷第l1期ChinJHepatol，November2013，Vo1．21，No．11·其他肝病·钙池操纵的钙离子通道在乙醇诱导的原代肝细胞钙超载及损伤中的作用崔瑞冰阚宝甜孙晓萌罗争郭蓉郭晓兰阎明【摘要】目的研究钙池操纵的钙离子通道(SOCs)在乙醇诱导的原代肝细胞钙超载及损伤中的作用。方法通过建立体外乙醇诱导原代肝细胞慢性损伤模型，检测SOCs通道蛋白分子：间质相互作用因子1(STIM1)及钙释放激活钙通道蛋白1(Oria1)的表达量及胞质中游离钙离子浓度([ca])的变化，并利用通道阻断剂鉴定SOts在慢性乙醇诱导原代肝细胞钙超载及损伤

2、中的作用。两组之间均数的比较采用检验，多组之间的比较采用完全随机设计单因素方差分析。结果0～800mmol／L乙醇(刺激24h)浓度依赖性降低原代肝细胞的存活率；400mmol／L乙醇刺激时细胞存活率为57．34％±2．34％(MTT)，因此选择400mmol／L乙醇作为下一步的刺激实验浓度。与正常对照组相比，400mmol／L乙醇刺激明显增加原代肝细胞STIM1及Grail的基因及蛋白表达量，且其表达增加持续至少72h；SOCs通道阻断剂EGTA、La、二氨基乙氧基双苯萘酯(2-APB)干预降低400mmol／L乙醇刺激原代肝细胞增高的[ca]水平、增高原代肝细胞存活率，三者之间差

3、异无统计学意义。结论乙醇可能通过增高原代肝细胞中SOCs通道蛋白分子表达，增加胞外钙离子内流而加重肝细胞钙超载及损伤。【关键词】肝细胞；钙超载；乙醇；钙池操纵钙离子通道Roleofstore-operatedCa2channeBinprimaryhepatocytesunderconditionsofcalciumoverloadandethanol-inducedinjuryCUIRui-bing,KANBao—tian，SUNXiao-meng,LUOZheng,GUORong,GUOXiao-lan,YANMing．ElderlyDigestiveSystemDepartmen

4、t,QiluHospitalofShandongUniversity,Jinan250012,ChinaCorrespondingauthor．"YANMing,Email：ymnlh@163．corn【Abs缸．a吐】ObjectiveToinvestigatetheroleofstore-operatedcalciumchannels(SOCs)inprimaryhepatocytesunderconditionsofcalciumoverloadandethanol-inducedinjury．MethodsTheinvitromodelofchronicethanol—ind

5、ucedhepatocyteinjurywasestablishedusingprimaryhepatocytesisolatedfromSprague-Dawleyrats．Ethanol-inducedchanges(24，48and72h；50，100，200，400and800mmol／L)inexpressionoftheSOCsproteinsstromalinteractionmolecule1(STIM1)andcalciumrelease-activatedcalciumchannelprotein1(Ofa1)weredetectedbyqualitativePC

6、Ranalysis(mRNA)andwesternbloRing(protein)．ThepossibleroleofthesetwoSOCsproteinsintheethanol—inducedextracellularcalciuminfluxandrelatedlivercellinjurywasdeterminedbytreatingthecellsystemwithvariouschannelblockers(EGTA，La抖，and2-APB)．CellviabilitywasdeterminedbyMTTassayandcytosolicfreecalciumionc

7、oncentrationwasdeterminedbyflowcytometry．ResultsAfter24hofexposureto0(untreated)to800mM／Lethanol，thecellviabilitywasreducedinaconcentration-dependentmanner．The400mmol／Lconcentrationofethanoldecreasedcellviabilityby57．34％士2．34％．and