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1、乙醇对小鼠原代培养肝细胞损伤及黄芩茎叶总黄酮保护作用的实验研究作者：李素婷，杨鹤梅，周晓慧【关键词】乙醇；,,肝细胞；,,原代培养；,,黄芩茎叶总黄酮；,,保护作用 摘要：目的研究黄芩茎叶总黄酮（SSTF）对乙醇损伤小鼠原代培养肝细胞的保护作用。方法采用胰蛋白酶消化、分离小鼠肝细胞进行原代培养，乙醇体外诱导肝细胞损伤，以不同浓度的SSTF对肝细胞保护，检测培养液中丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性和肝细胞内丙二醛（MDA）含量，MTT法测肝细胞存活率。结果SSTF（100，200，300mg・
2、;L-1）明显改善肝细胞存活率，抑制乙醇引起的ALT活性的升高，对肝细胞中MDA含量的升高有明显的抑制作用。结论SSTF对乙醇损伤的小鼠肝细胞有明显的保护作用，其机制可能与SSTF的抗氧化作用有关。 关键词：乙醇；肝细胞；原代培养；黄芩茎叶总黄酮；保护作用 TheProtectiveEffectofTotalFlavonoidinscutellariabaicalensisStem-LeafonPrimaryCulturedMiceHepatocytesInjuredbyEthanol Abstr
3、act：ObjectiveTostudytheprotectiveeffectoftotalflavonoidinScutellariabaicalensisstem-leaf(SSTF)onprimarymicehepatocyesinjuredbyethanol.MethodsPrimaryhepatocytesaryculturedhepatocytesfor12h.Thecontentofmalondialdehyde(MDA)inhepatocytesandtheactivityofALTin
4、culturalsupernatantinedbygeneralmethods,theviabilitiesofhepatocyteseasuredbyMTT.ResultsTheelevationofMDAcontentofhepatocytesandALTlevelinsupermatantofculturalhepatocyesarkablybySSTF,hepatocytesviabilityprovedsignificantlybySSTF.ConclusionSSTFhasaprotecti
5、veactiononprimarymicehepatocyesinjuredbyethanol.Thismightbeassociatedarycultured;SSTF;Protectiveeffect 肝脏是酒精代谢的主要脏器，过量饮酒可造成肝脏不同程度的损害，并进一步发展为脂肪肝、肝纤维化和肝硬化，严重危害人类健康。了解酒精性肝损伤的发病机制，筛选有效预防和治疗的药物应用于临床，是当前面临的重要课题。黄芩茎叶总黄酮(SSTF)是我院中药所对黄芩的茎叶部分提取的有效成分，整体实验已证实其对肝损伤有
6、保护作用［1］。本文建立体外乙醇性肝细胞损伤模型，在细胞水平上进一步研究乙醇性肝损伤的机制及SSTF对肝细胞保护作用机制。 1材料与方法 1.1药品与试剂SSTF（含总黄酮73%）：承德医学院中药研究所提供，临用前以蒸馏水配制，用饱和碳酸氢钠调pH=7.6；Hanks液高压灭菌,4℃保存；0.8g・L-1胰蛋白酶：用Hanks液溶解，过滤除菌，调pH7.2，分装,-30℃保存；基础培养液：RPMI1640培养基10.0g,用超净水900ml溶解,5.6%NaHCO3调pH至7.2，定溶
7、到1000ml,过滤除菌，临用前每80ml,加入新生小牛血清20ml,青霉素100u・ml-1,链霉素100μg・ml-1,胰岛素5μg・ml-1；MTT：SIGMA公司；ALT，MDA测定试剂盒:南京建成生物工程研究所。 1.2动物昆明种小鼠，1~3d龄乳鼠，雌雄不限，清洁级，承德医学院实验动物管理中心提供。 1.3仪器CO2培养箱（TaibaiLNA-122D日本），MD-100半自动生化分析仪（美国Bayer公司），721DA含量,MTT法测定肝细胞存
8、活率。 1.6SSTF对诱导肝细胞损伤的作用取上述培养24h肝细胞，设乙醇损伤模型组、SSTF(100，200，300mg・L-1)3个剂量保护组、正常对照组，每组设8个复孔。模型组和SSTF组加入乙醇100mmol・L-1，同时SSTF组加入不同浓度的SSTF，正常对照组加不含血清的培养液，继续培养12h，收集培养上清液检测ALT活性和MDA含量，MTT法测定肝细胞的存活率。 1.7统计学处理数据以±s表示
