黄芩茎叶总黄酮对原代培养大鼠肝细胞损伤的保护作用论文

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1、黄芩茎叶总黄酮对原代培养大鼠肝细胞损伤的保护作用论文李素婷，杨鹤梅，周晓慧【关键词】黄芩茎叶总黄酮；,,肝细胞；,,原代培养；,,保护作用；,,机制摘要：目的研究黄芩茎叶总黄酮（SSTF）对原代培养大鼠肝细胞氧化损伤的保护作用及其机理。方法采用胰蛋白酶消化、分离大鼠肝细胞进行原代培养，用H2O2和CCl4体外诱导肝细胞损伤，同时加以不同浓度的SSTF对肝细胞保护，检测培养液中丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性、肝细胞内丙二醛（MDA）含量和谷胱甘肽过氧化物酶（GSHpx）活性，MTT法测定肝细胞增殖活性。结果与模型组比较，SSTF明显抑制H2O2和CCl4引起的肝细

2、胞培养液中ALT活性的升高.freelofScutellariabaicalensisStem-leafTotalFlavonoidonPrimaryCulturedRatHepatocytesInjuredbyH2O2orCCl4Abstract：ObjectiveTostudytheprotectiveeffectandpossiblemechanismofScutellariabaicalensisstem-leaftotalflavonoid(SSTF)onprimaryrathepatocyesinjuredbyH2O2orCCl4.MethodsPr

3、imaryhepatocytesaryculturedhepatocytes.Thecontentsofmalondialdehyde(MDA)andactivityofglutathionperoxidase(GSH-px)inhepatocytesandtheactivityofALTinculturalsupernatantinedbygeneralmethods,theviabilitiesofhepatocyteseasuredbyMTT.Resultsparedodelgroup,SSTFcouldrestoreremarkablyALTleveli

4、nsupermatantofculturalhepatocytes,decreaseMDAcontentandelevateGSHpxactivityofhepatocytes,.freelaryrathepatocyesinjuredbyH2O2orCCl4.Thesemightbeassociatedarycultured;Protectiveeffect;Mechanism.黄芩茎叶总黄酮（Scutellariabaicalensisstem-leaftotalflavonoid，SSTF）是承德医学院中药研究所从唇型科植物黄芩的茎叶部分提取的有效成分，整

5、体实验已证实SSTF具有抗炎、抗氧化、抗动脉粥样硬化及保肝等作用［1～4］。为进一步研究SSTF保肝作用及其机制，本文采用胰蛋白酶消化法分离肝实质细胞进行体外培养，用CCl4和H2O2体外诱导肝细胞氧化损伤模型，在细胞水平上证实SSTF对肝细胞损伤的保护作用及其机制，为进一步阐明SSTF的药理作用及中药新药的研发和应用提供可靠依据。1材料与方法1.1药品与试剂SSTF（含总黄酮73%）：承德医学院中药研究所提供，临用前以蒸馏水配制，用饱和碳酸氢钠调pH=7.6；Hanks液高压灭菌，4℃保存；0.80gL-1胰蛋白酶：用Hanks液溶解，过滤除菌，调pH7.2，

6、分装,-30℃保存；1%PVP：北京华美公司提供；基础培养液：RPMI1640培养基10.0g，用超净水900ml溶解，5.6%NaHCO3调pH至7.2，定溶到1000ml，过滤除菌，临用前每80ml，加入新生小牛血清20ml，青霉素100μgml-1，链霉素100μgml-1，胰岛素5μgml-1；MTT：SIGMA公司；ALT，MDA，GSH-Px测定试剂盒：南京建成生物工程研究所。1.2动物2~3d龄SD大鼠乳鼠，雌雄不限，清洁级，承德医学院实验动物管理中心提供。1.3仪器CO2培养箱（TaibaiLNA122D日本），MD100半自动生化分析仪（美国B

7、ayer公司），721DA含量和GSH-PX活性，MTT比色法测定96孔板中肝细胞的存活率。1.6SSTF对CCl4诱导肝细胞损伤的影响设CCl4损伤模型组、SSTF(50，100，200mgL-1)3个剂量保护组、正常对照组，每组设8个复孔。肝细胞培养24h后换液，模型组和SSTF组加入CCl4(二甲基亚枫配制)，终浓度为10mmolL-1，同时SSTF组加入不同浓度的SSTF，正常对照组加不含血清的培养液，继续培养6h，收集24孔板中培养上清液检测ALT活性，MTT比色法测定96孔板中肝细胞的存活率。1.7统计学处理数据以(±s)表示，用SPSS计算机软件进

8、行统计学分析,组间比较采