哺乳动物雷帕霉素靶蛋白及真核细胞启动因子4E在肺鳞癌组织中的表达及临床意义.doc

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1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白及真核细胞启动因子4E在肺鳞癌组织中的表达及临床意义【关键词】肺鳞癌;哺乳动物雷帕霉素靶蛋白;真核细胞翻译启动因子4E;免疫组化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是近年来发现的一种进化上高度保守的非典型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是一种信号蛋白。最新研究指出信号通路处于生长调节的中心环节，参与多种病理和生理过程，在细胞的生长、分化、增殖、迁移和存活上扮演了重要角色。真核细胞翻译启动因子4E(eukaryotictranslationinitiationfactor4E,eIF4E)是

2、mTOR信号通路的下游位点，是真核细胞mRNA翻译的最有效的限速调节因子，在蛋白质合成的起始阶段起重要的调控作用〔1,2)。本实验主要研究mTOR和eIF4E在肺鳞癌中的表达及二者与临床病理参数的关系，并研究二者之间的相关性，以探讨其在肺鳞癌发生发展中的作用，寻找可能的肺鳞癌治疗的有效新途径。1材料与方法1.1标本选取郑州大学第一附属医院胸外科2008年2月至2009年2月经手术切除的有完整资料的肺鳞癌80例，每例均取癌灶、淋巴结，选取癌旁及正常肺组织各10例做为对照组。80例肺鳞癌中男性64例，女性

3、16例，年龄36~74岁，平均年龄(61±4.5)岁。按2002版UICCpTNM分期〔3),I期21例，II期46例，用期13例。有淋巴结转移65例，其中多于2个淋巴结转移的53例。肿块直径<5cm的46例,N5cm的34例。全部病例均为第一次手术，术前未经过化疗、放疗，所有病例均经病理学证实为鳞癌。1.2实验试剂兔抗人单克隆抗体mTOR和eIF4E均购自美国signalTOR和eIF4E稀释浓度均为1：100。以PBS液代替一抗做阴性对照，以已知肿瘤标志物做阳性对照，同时采用组内对照。1.4

4、结果判定mTOR和eIF4E定位于细胞质，部分位于细胞膜，阳性染色为淡黄色、棕黄色或棕褐色。采用二级积分法，阳性细胞计数：根据阳性细胞所占5个以上高倍显微镜视野比例计数，<5%为0分，5%〜25%为1分，26%〜50%为2分，>50%为3分。染色强度分类：淡黄色为1分，黄或深黄色为2分，棕色或棕褐色为3分。二者计分相乘大于1分为阳性。采用双盲法由两位病理科医师计分。1.5统计学分析应用SPSS15.0版本统计学软件对结果进行x2检验及Fisher精确检验和Spearman相关分析。2结果2

5、.1不同组织中mTOR和eIF4E的表达肺鳞癌中mTOR和eIF4E呈弥漫性或散在分布的棕黄色颗粒表达于细胞质，mTOR和eIF4E的表达率分别是52.5%和75%,均明显高于对照组(P<0.05),二者在癌旁组织与正常肺组织中的表达无差别。见表1。表1mTOR和eIF4E在肺鳞癌及肺非肿瘤组织中的表达2.2mTOR和eIF4E在肺鳞癌中的表达与临床病理参数之间的关系肺鳞癌组织中mTOR和eIF4E的表达与肿瘤的病理分化程度、肿瘤大小、有无淋巴结转移明显相关(P<O.O5),TNM分期中I

6、期与Hla期比较mTOR、eIF4E水平有显著差异(P<O.O5),而T期与II期及II期与Illa期二者之间表达水平无差别(P>0.05),其表达与淋巴结转移多少无关，与患者性别、年龄、吸烟无关。见表2。2.3mTOR和eIF4E的相关性检验Spearman相关性检验显示肺鳞癌中mTOR阳性42例，eIF4E阳性60例，二者双阳性表达38例，双阴性表达16例，二者表达呈显著正相关(r=0.376,P=0.001)o表2mTOR和eIF4E在肺鳞癌中的表达与临床病理参数之间的关系与I期比较

7、：l)P<0.05mTOR是一种进化上高度保守的非典型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，属于磷酸肌醇激酶(phosphatidylinositolkinaserelatedproteinkinase,PIKK)家族，分子量289kD,含2549个氨基酸。受上游刺激因子如生长因子、胰岛素、营养因子、压力等激活后的mTOR引起其下游真核细胞启动因子4E结合蛋白1(4EBP1)的磷酸化，导致4EBP1从mRNA的5'cap的eIF4E释放出来，此口寸eIF4E可与eIF4G,eIF4B,eIF4A结合为eIF4

8、F。由于eIF4E的表达增高，可导致细胞周期蛋白DI、Rb蛋白、低氧诱导因子1(HIF1)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、鸟氨酸脱舞酶等这一类mRNA5'端非翻译区调控因子的活性升高，促使mRNA的翻译增强，使细胞由G1期向S期转换，调控细胞生长和代谢〔5〜10)。本实验通过免疫组化检测mTOR及eIF4E在肺鳞癌、癌旁组织及正常肺组织的表达。结果显示mTOR及eIF4E在肺鳞癌组织中的表达明显高于癌旁及正常肺组织，说明肺鳞癌中存在异常活化的mTOR