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1、转化生长因子B1在食管鳞癌组织中的表达及临床意义［摘耍］日的通过检测食管鳞癌组织标本及癌旁正常组织标木中转化生长因子Bl(TGF-P1)的水平，探讨TGF-B1与食管鳞癌发生发展之间的关系。方法收集2009年9月〜2011年10月沈阳医学院奉天医院胸外科39例食管鳞癌组织标木及癌旁正常组织标木,用逆转录聚合酶链反应的方法对标本进行检测，比较食管鳞癌组织及癌旁正常组织TGF-B1信使RNACTGF-B1mRNA)的表达水平。结果食管鳞癌组织中TGF-31mRNA水平(0.76±0.09)显著高于癌旁正常组织(0.23±0・05)；而
2、随着病理分期I〜III期TGF-01mRNA水平逐渐增高(I期：0.52±0.06；II期：0.73±0.03；III期：0・92±0.05)。有淋巴结转移组的TGF-P1mRNA水平(0.91±0.06)显著高于无淋巴结转移组(0.55±0.08)。随着肿瘤细胞局部浸润深度增加，TGF-P1mRNA水平逐渐增高(T1：0.53±0.03；T2：0.69±0.05；T3：0.93土0.03)。结论TGF—B1水平的增高与食管鳞癌的发生发展关系密切。［关键词］转化生长因子B1；逆转录聚合酶链反应；食管鳞癌；病理特征［中图分类号］R7
3、35.1［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2013)06(b)-0025-03转化生长因子B(transforminggrowthfactor,TGF-P)是一类多功能的多肽类细胞生长因子，儿乎体内的每个细胞都产生TGF-0并存在其受体，参与调节细胞的生长、分化、形态发生及凋亡［1］。目前在人类中,发现冇TGF-Bl、TGF-02、TGF-33三个亚型，TGF-31作为TGF-B超家族的一个重要成员，已被证实在细胞的生长与分化、细胞外基质（ECM）的合成与沉淀、血管的生成及细胞凋亡中起重要作用。在肿瘤的发生发展过程中
4、，TGF-01能诱导c-sis的表达，但抑制c-myc的表达，TGF-P1具有双相调节作用：在肿瘤早期，抑制肿瘤细胞的生长；在肿瘤的中晚期,它成为肿瘤牛长的刺激因子。多年來，TGF-B仍是肿瘤领域研究的热点之一，研究发现TGF-P1作为一类具有多种生物学活性的细胞因子，参与了肿瘤的发生、进展和转移的各个环节并起到重要作用［2］。TGF-B1在食管鳞癌的研究中尚不多见，本研究对TGF-B1在食管鳞癌组织中的表达与食管鳞癌的临床分期、淋巴转移、肿瘤浸润深度的关系进行相关探讨，从而进一步明确TGF-B1在食管鳞癌的发牛发展过程具有重要作
5、用。1对象与方法1.1研究对象收集2009年9月〜2011年10月沈阳医学院奉夭医院胸外科食管鳞癌标本共39例，其中包括癌组织上、下5〜8cm的正常组织，手术切除后30min内置于液氮屮保存。所冇病例术前均未发现冇远处转移，未行放疗、化疗，术后均有病理证实。39例病例中男25例，女14例；250岁者26例，〈50岁者13例，年龄38〜71岁，平均56.4岁；术后病理均为食管鳞癌；TNM分期I期6例，II期21例，III期12例;其中23例有淋巴结转移。分期标准依照食管鳞癌AJCC指南中的食管鳞癌TNM分期标准划分。组织分化程度：高
6、分化9例，中分化13例，低分化17例。1.2方法1.2.1RNA的提取食管鳞癌组织与癌旁正常组织分别取100mg,加入1mbTrizol,组织匀浆器将组织匀浆，室温保持5min使组织充分裂解，加入0.2mL氯仿充分振荡15s,室温保持3min,12000r/min,4°C离心15min,轻取最上层无色水相，加入0.5mL异丙醇室温保持10min,12000r/min,4°C离心lOmin,弃上清，加入75%乙醇1mL,12000r/min,4°C离心10min,弃上清，室温干燥5~10min,将沉淀溶于适量DEPC水中，测0D26
7、0/0D280及RNA浓度，分装，-80°C冰箱中保存。1.2.2反转录及PCR扩增反转录体系如下：5XPrimeScriptBuffer2共4pL,PrimeScriptRTEnzymeMixI1uL,RTPrimerMixL,总mRNA10□L,加RNaseFreedH20至20uLo反转录条件:37°C15min,85°C5s,4°C,反转录产物于-20°C保存。试剂：RnaseFreedH2017.5uL,10XPCRbuffer2.5PL,dNTP1.5uL,TGF-P1上游引物0.5uL,TGF-B1下游引物0.5pL
8、,TaqE0.5uL反转录PCR产物2uL,总体积25uLoPCR反应条件为：95°C变性2min,94°C1min,55°C1min,72°C90s,循环30个周期，最后于72°C延伸10min。TGF-Bl上游引物:5'-GCCCTGGACAC
