reck在人喉鳞癌组织中的表达及临床意义

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1、RECK在人喉鳞癌组织中的表达及临床意义【摘要】目的通过检测80例人喉鳞癌组织中RECK的表达情况，讨探RECK在喉鳞癌发生发展中的作用。方法用免疫组化法、蛋白印迹分析(Westernblot)技术，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测在喉鳞癌组织标本中RECK的表达。结果RECK蛋白在正常喉组织及喉鳞癌组织的大片癌巢中不表达，仅在角化珠中和粘膜固有层中的混合腺的腺细胞有表达。结论本研究提示RECK基因在喉癌的发生发展中不起关键作用。【关键词】喉鳞癌;RECK基因Abstract:Objectiv

2、eTodiscussthepotentialroleofRECKinLaryngealsquamouscellcarcinoma(LSCC)bytestingtheexpressionofRECKinhumanLSCC,atotalof80LSCCpatients.Methods(1)RECKexpressioninsurgicallyresectedtissuesamplesoflaryngealcarcinomas(n=80)wereexaminedimmunohistochemically;(2)

3、TheexpressionsofRECKwasevaluatedbyWesternblotandReversetranscriptionpolymerasechainreactions(RT-PCR).ResultsThepositiveRECKstainedinthehornypearlandglandulartubecells,butnotinthecarcinomalcells.ConclusionsRECKgenecantbeconsideredasakeypointinthepathogen

4、esisofLSCC.10　　Keywords:Laryngealsquamouscellcarcinoma(LSCC);RECKgene　　喉癌是头颈部第二位原发于上皮的最常见的恶性肿瘤，发病率仅次于鼻咽癌。在过去40年里对喉癌的发病机理的研究已取得许多进步，但喉癌发生的确切机理、侵袭和转移的分子机制还不十分清楚。RECK(reversion-inducing-cysteine-richproteinwithkazalmotifs)基因是近年来发现的新型基质金属蛋白酶抑制剂[1]，目前研究认为作为一种

5、独立的膜锚合基质金属蛋白酶调节因子，RECK基因在多种正常组织中均高表达，而在肿瘤组织中表达量明显下降甚至不表达，且RECK基因表达下降的幅度与肿瘤侵袭转移能力成明显正相关。因此，RECK基因是目前研究较为广泛的一种抑癌基因。　　1材料与方法　　1.1临床资料　　喉癌组织80例,来源于2005年5月至2007年10月辽宁省肿瘤医院行喉癌手术的切除标本,患者年龄42～81岁,平均60.5岁,均保存有完整的临床和病理资料:I期24例，II期12例，III期22例，IV期1710例。每1例石蜡切片皆包括癌组织

6、和其癌旁的正常黏膜组织。　　1.2免疫组化染色　　山羊抗人多克隆抗体RECK(1∶50倍稀释)购自SantaCruzBiotech，免疫组化SP试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。所有组织均经甲醛固定，常规石蜡包埋，免疫组化SP法染色参照试剂说明书进行，RECK采用高温高压法修复抗原。用已知的阳性切片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。　　1.3Westernblot法检测组织中RECK蛋白表达　　应用RIPA裂解液裂解组织,应用分光光度计测定总蛋白浓度SDS-PAGE凝胶电泳(90V,2h),电转仪

7、电转,(300mA,1.5h,4℃)。将硝酸纤维素膜与适当稀释的第一抗体(1∶200)室温下反应2h,再与用杂交液按比例(1：8000)稀释的二抗杂交2h,ECL反应显色。　　1.4RT-PCR法检测组织中RECK基因的mRNA表达　　Trizol一步法抽提组织中的总RNA,引物设计见参考文献[2]及国际互联网cDNA文库，由上海生物工程公司合成。RECK(477bp):5-CCTCAGTGAGCACAGTTCAGA-3(上游),5-GCAGCACACACACTGCTGTA-310(下游);β-

8、actin(195bp)：5-CCATGGAGAAGGCTGGG-3(上游)，5-CAAAGTTGTCATGGATGACC-3(下游)。扩增参数：94℃预变性2分钟，94℃变性45秒，60℃复性45s，72℃延伸45s，扩增30个循环，72℃延伸加时10min，4℃保存。2%琼脂糖凝胶电泳后,采用生物图像分析仪检测RECK基因在不同组织中表达情况。　　1.5结果判定　　免疫组化结果判定标准RECK以实质细胞胞膜或胞质出现明显的黄色或