线粒体功能障碍在晚期糖基化终产物致肾小球内皮细胞通透性增加中的作用机制.pdf

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1、144新医学2015年3月第46卷第3期基础研究论著线粒体功能障碍在晚期糖基化终产物致肾小球内皮细胞通透性增加中的作用机制唐骅李灿明赖渭妍饶嘉玲叶增纯娄探奇【摘要】目的探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对大鼠肾小球内皮细胞(rGEnC)通透性的影响及线粒体功能障碍在其中的作用。方法采用原代培养的rGEnC，予AGEs80ms／L作用24h，采用跨内皮细胞电阻抗和异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白滤过率观察通透性的变化，MitoSOX试剂盒检测细胞内活性氧，Jc．1荧光标记法检测线粒体膜电位(△1Irm)，

2、荧光素酶检测系统测定三磷酸腺苷(ATP)的生成，蛋白免疫印迹法检测NF—E2相关因子2(Nrf2)的表达。结果AGEs可引起rGEnC通透性升高，活性氧产生增加，采用叔丁基对苯二酚(tBHQ)(20~mol／L)、N一乙酰半胱氨酸(NAC)(10mmol／L)和抗AGE受体抗体(100m#L)预处理后，上述AGEs作用被抑制。AGEs可引起rGEnC△m下降，ATP和Nrf2减少，而anti—RAGE抗体可抑制△1I，m下降和ATP减少，tBHQ则能抑制△m下降和Nrf2减少。结论AGEs可导致rGE

3、nC线粒体功能障碍，引起活性氧产生增加，从而导致rGEnC间通透性增加。【关键词】晚期糖基化终产物；线粒体；肾小球内皮细胞；氧化应激Roleofmitochondrialdysfunctioninadvancedglycationendproducts-inducedpermeabilityincreasesinglomerularendothelialcellsTangHua，LiCanming，LaiWeiyan，RaoJialing，YeZengchun，LouTanqi．Departmento

4、fNephrology，theThirdAffiliatedHospitalofSunYat—senUniversity，Guangzhou510630，ChinaCorrespondingauthor，LouTanqi，E—mail：Lou．tq@163．corn【Abstract】0bjecfiveToinvestigatetheeffectofadvancedglycationendproducts(AGEs)onthepermeabilityofglomerularendothelialcel

5、ls(rGEnC)inratsandtheroleofmitochondrialdysfunctioninthispathologicalprocess．MethodsPrimaryculturedrGEnCwereincubatedwithAGEs(80mg／L)for24h．Thechangesinendothelialpermeabilitywereinvestigatedbytransendothelialelectricalresistanceandthefluxofflu—orescein

6、isothiocyanate—conjugatedbovineserumalbumin．MitoSOXkitwasusedtodetectintracellularreactiveoxygenspecies(ROS)．Mitochondrialmembranepotential(△m)wasmeasuredbyJC1fluoresceinstaining．Thegenerationofadenosinetriphosphate(ATP)wasevaluatedbyluciferaseassaysyst

7、em．TheexpressionofNF．E2．relatedfactor2(Nrf2)wasdetectedbywesternblotting．ResultsThemonolayerpermeabilityandthegenerationofROSofrGEnCwereincreasedbyAGEs．Pretreatmentwithtert—Butyl—hydroquinone(tBHQ)(20txmol／L)，N-acetylcysteine(NAC)(10mmol／L)andanti—RAGEa

8、ntibody(100ms／L)couldsuppressthedetrimentaleffectofAGEs．Thedeclineof△Wm，ATPandNrt2wereinducedbyAGEs，whereasthedecrea-sesof△1IrmandATPcouldbeblockedbypretreatmentwithanti．RAGEantibodyandthedeclineof△1王rmandNrf2inhibitedbytBHQpretr