碱性成纤维细胞生长因子在大鼠腮腺萎缩和再生过程中的表达及意义.pdf

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1、中国实验诊断学2015年3月第19卷第3期—359一文章编号：1007—4287(2015)03—0359～04碱性成纤维细胞生长因子在大鼠腮腺萎缩和再生过程中的表达及意义刘士维，卢浩，柳康，张赐童，刘麒麟，孙宾，张伟(吉林大学口腔医院口腔颌面外科，吉林长春130021)头颈部的放射治疗、炎症等常会引起涎腺分泌gm切片，行苏木精一伊红(Hematoxylin-Eosin，功能障碍，影响患者的生活质量，因此，治疗涎腺萎HE)染色，置于光镜下观察组织学变化。缩，促进腺体功能恢复日益引起人们的重视。碱性1．4免疫组织化学

2、观察成纤维细胞因子(bFGF)是目前公认的最强的促血应用UltraSensitiveTMSP法免疫组织化学染管生成因子和促创伤修复因子之一_1]，已有国外学色，DAB显色，试剂：兔抗鼠多克隆抗体(bFGF)(购者研究表明bFGF在大鼠下颌下腺中有表达并可以于武汉博士德公司，中国)、兔抗鼠多克隆抗体PC—促进下颌下腺组织修复]。与下颌下腺相比，腮腺NA抗体(购于Immunoway公司，美国)，抗体浓度在组织结构以及功能上与其有一定的区别，虽有学稀释1：200。方法：苏木精轻度复染、盐酸酒精分者已证实bFGF存在于大鼠

3、的腮腺组织中]，但对化、氨水返蓝，镜下观察bFGF、PCNA的表达变化。bFGF在腮腺组织萎缩及再生过程中表达变化及生1．5统计分析理功能的研究还未见报道，本实验通过建立Wistar将染色后的免疫组织化学切片置于Olympus大鼠腮腺主导管结扎和再通模型L4]，研究在此过程BX51T(Olympus公司，日本)高倍显微镜下观察，中bFGF的表达及与腮腺细胞增殖的线性关系。每张切片随机选择5个视野拍照，采用ImagePro1材料和方法Plus6．0图像分析软件(MediaCybernetics，美国)对1．1实验对象

4、bFGF、PCNA的表达水平进行定量分析，细胞核出7周龄SPF级雄性Wistar大鼠84只，体重约现褐色染色为阳性表达。所有统计学处理均采用200—250g，购于吉林大学动物实验中心。84只SPSS21．0专业软件进行统计学分析，所有数值均被Wistar大鼠随机分为3组——空白对照组6只(不表达为均数士标准差(±s)。P<0．05被认为数据做任何处理)、腮腺主导管结扎组42只及主导管结差异具有统计学意义，bFGF表达和细胞增殖的相扎再通组36只，常规饲养。关性用Spearman等级相关分析，以双侧P<0．051．2

5、腮腺创伤和再生模型的建立为差异有统计学意义。结扎组和再通组大鼠l0水合氯醛3mL·2结果kg行腹腔麻醉，游离腮腺主导管和伴行的面神经2．1大鼠腮腺结扎后与再通后的形态学改变颊支，用1号线双重结扎主导管，皮肤对位缝合。术结扎组：导管结扎1天后腺体体积较正常腺体后给予200单位青霉素，回笼常规饲养。结扎组大增大，随后2天有缩小趋势，第3天大至恢复正常大鼠在术后1d、3d、5d、7d、14d、28d、60d处死，沿小，第7天时腺体明显萎缩，至28天时萎缩到正常腮腺主导管切取右侧腮腺，立即放置4多聚甲醛腺体三分之二，颜色加

6、深，质地变硬，腺小叶结构模糊。溶液中固定，再通组大鼠在导管结扎第14天取出结扎线，确保导管再通，分别于再通后1d、3d、5d、7再通组：主导管再通后，腺体颜色、体积、质地逐渐恢复正常，再通后14天时，腺体外观已恢复至正d、14d、28d处死，同样方法获取腮腺标本。1．3组织学观察常腺体相近。2．2组织学观察结果腮腺标本置于4多聚甲醛溶液中固定24h后，梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋，制成42．2．1正常腮腺：腺体表面覆有被膜并且深入到腺体内，将腺体分隔开，形成许多腺叶和腺小叶，腺体*通讯作者是由腺泡细胞组成，

7、腺泡细胞大小均匀，规则排列，ChinJLabDiagn，March，2015，Vol19，No．3bFGF还会刺激分泌它的细胞产生更多的bFGF[=1。本研究观察到腮腺主导管结扎1d、3d后，bFGF阳性表达增加，在第3天时达到峰值，随后阳性表达降低但保持平稳，原因可能是因为当损伤刺激出现后，激发了细胞基质中bFGF的前体使其大量释放，虽然产生bFGF的腺泡细胞的不断萎缩，数量减少，但已经释放出来的bFGF会刺激腺泡细胞产生更多的bFGF，但随着大量腺泡细胞萎缩、消失，分泌功能降低，而导管上皮细胞分泌的bFGF较平

8、稳，故总体bFGF表达下降。而主导管再通后随着腺泡细胞的恢复、再生，分泌bFGF的量也增加，在导管再通3d时达到峰值，同时分泌的bFGF也为腺泡细胞的增生提供条件，但随着损伤刺激去除的时间延长，腺体逐渐恢复正常，bFGF的表达也趋于稳定。主导管由结扎到再通，bFGF的表达部位由腺泡细胞的胞浆和基质，到腺泡细胞的基底膜和导管样结构周围，再到新义意生腺参考泡m细