perlecan在大鼠牙囊发育过程中表达及意义

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1、第四军医大学硕士学位论文Perlecan在大鼠牙囊发育过程中的表达及意义姓名：陈磊申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学（正畸）指导教师：段银钟20070501独创性声明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名

2、：日期：保护知识产权声明本人完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第四军医大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为第四军医大学。学校可以公布论文的全部或部分内容（含电子版，保密内容除外），可以采用影印，缩印或其他复制手段保存论文。学校有权允许论文被查阅和借阅，并在校园网上提供论文内容的浏览和下载服务。论文作者签名：导师签名：日期：第四军医大学硕士学位论文Perlecan在大鼠牙囊发育过程中的表达及意义硕士研究生：陈磊导师：段银钟教授(主任医师)第四军医大学口腔医学院正畸科，西

3、安710032中文摘要牙囊的发育是一个非常复杂的过程，从胚胎期一直延续到出生以后，其间要经过开始发育、增殖、形态分化、基质沉积、成熟等阶段，最后才[1]能形成牙周组织。牙囊的发育和分化与细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)、生长因子和基底膜等因素非常密切。基底膜主要起支架作用，ECM和生长因子附着于基底膜，生长因子作为诱导信号(inductivesignal)在上皮和间充质之间的相互作用中起着重要作用。ECM在细胞的粘附、扩散及移行方面意义深远。串珠素(perlecan)作为重要的ECM蛋白，由核心蛋白和4条硫酸肝素(heperins

4、ulfate,HS)侧链组成，与成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor,FGF)等生长因子关系密切，在组织的发育过程中具有重要的意义。因为其分子结构呈串珠状，1991年Hassell等将其命名为perlecan。Perlecan作为ECM中的主要蛋白聚糖之一，可以作为一种稳定基质结构和细胞-基质相互作用的粘合剂，并介导生长因子信号对细胞增生和分化起作用，显示出结合基底膜蛋白的活性。其在骨、血管等器官发育过程中的作用已[2]有报道。在牙囊发育过程中，perlecan是否有表达，还未见相关研究报道。本实验采用出生后0天、1天、1周、2周

5、的SD大鼠各10只，在腹腔麻醉下取其下颌第一磨牙及其牙囊组织，并制作标本，运用免疫组化、灰2第四军医大学硕士学位论文度测量等方法，观察perlecan在牙囊各发育时间段的表达。结果显示，出生后各时间组大鼠牙囊组织中perlecan均为阳性表达，主要分布在细胞周围的基质中。出生0天，成釉器与牙乳头间的基底膜、内釉和外釉上皮呈阳性表达，牙囊组织有阳性信号；出生1天，成釉器进一步发育，基底膜、外釉、牙囊、牙乳头细胞均有阳性表达；出生1周，内釉上皮细胞开始分化为成釉细胞，牙本质细胞尚未形成，成釉细胞、牙囊细胞呈阳性表达；出生后2周，釉基质、牙本质已形成，牙囊组织开始

6、形成牙骨质、牙槽骨，成釉细胞呈阳性表达。灰度测量结果采用重复测量的方差分析。分析结果表明，1天组、1周组分别与0天组、2周组有明显差别(P<0.05)；而1天组、1周组之间无统计学差异(P>0.05)；0天、2周之间无统计学差异(P>0.05)。运用荧光双标perlecan与碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblaastgeowthfactor,bFGF)，在激光扫描共聚焦显微镜(1aserscanningconfocalmicroscope,LSCM)下观察perlecan与bFGF在牙囊组织发育过程中的分布，perlecan与bFGF在大鼠牙囊

7、发育过程中呈先后不同时相的表达，染色主要为牙囊细胞（钟状晚期）及牙骨质牙槽骨内侧（硬组织形成期）。Perlecan主要分布在牙囊细胞周围基质中，在造釉器中高度表达，牙囊细胞的高表达区主要集中在小血管周围；bFGF在牙囊细胞内外均有表达，在硬组织形成期，bFGF的高表达区主要集中在牙骨质和牙槽骨。0天组、1天组、1周组perlecan阳性表达程度逐渐增强，perlecan的阳性程度表达高于bFGF；2周组perlecan阳性表达程度有所下降，bFGF的阳性程度表达高于perlecan；0天组、1天组、1周组、2周组bFGF阳性表达程度逐渐增强。实验结论：1.完

8、成了对bPerlecan基因的正确克隆和表达，建立了