展看大鼠肝癌发生过程中bfgf的表达及意义

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1、展看大鼠肝癌发生过程中bFGF的表达及意义;白咸勇，贾秀红，刘同慎，李笑岩【目的探索碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgroainistrationofdiethylnitrosamine(DEN)，theexpressionofbasicfibroblastgromunohistochemicaltechnique.ResultsTheincidenceofhepatocarcinogenesisinducedbyDENalrats，afesbetent，andthepositiveexpressionofbFGFberofbFGFpositivehepa

2、tocytesincreasedalongajorityofhepatocytesofbasophilicnodulesexpressedbFGFat18thinistration.ConclusionbFGFisassociatedcloselyentandprogressionofhepaticcarcinoma.【Keymunohistochemistry恶性肿瘤的发生、发展、浸润及转移均依靠于肿瘤新生血管的天生［１］。在肿瘤血管天生过程中，促血管生长因子扮演着重要角色，其中碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgroa，HCC)是最常见的恶性肿瘤之一，具

3、有高侵袭、易于早期转移、预后差的临床病理特征。但有关bFGF在肝癌发生发展过程中的表达及意义的报道较少。为了解bFGF在肝癌发生发展过程的表达及意义，探索其和肝癌生物学行为的关系。本实验采用免疫组织化学方法，对二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌过程中bFGF表达的变化进行了观察，以便为肝癌发生和防治探究提供实验依据。1材料和方法1.1肝癌动物模型的建立和病理学检查雄性/ml)饮水，连续12周；对照组15只，自由饮取自来水。各组动物自诱癌之日起，分别在第4、8、12、16、18周各随机选择3只大鼠断头正法，取肝组织，中性福尔马林固定，常规石蜡包埋切片，厚5μm，HE染色，光镜观察

4、。1.2bFGF免疫组织化学染色采用ABC法，兔抗人bFGF多克隆抗体购自Sigma公司，免疫组织化学ABC试剂盒购自美国Vector公司。主要反应步骤如下：(1)切片脱蜡至水；(2)3%H2O2甲醇30min；(3)1：5正常羊血清孵育30min；(4)兔抗人bFGF多克隆抗体(1：500)，4℃孵育过夜；(5)生物素化羊抗兔IgG(1：200)孵育30min；(6)ABC液(1：1：100)孵育30min；(7)DAB显色，水洗后常规脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，以PBS代替一抗作为阴性对照。2结果2.1诱癌过程中大鼠肝脏的病理变化第1～４周诱癌大鼠肝脏肉眼观察未见明显异

5、常，镜检肝小叶结构完整，但可见散在的坏死灶伴炎性细胞浸润，并且肝细胞发生嗜酸性变。第8～１２周诱癌大鼠肝脏体积逐渐增大，表面可见散在的灰白结节，并逐渐增多，镜检可见肝脏内出现大量嗜酸性结节，并向嗜碱性结节发展。第18周，肝脏表面布满灰白色结节，镜检为高分化肝细胞癌，门管区静脉内可见癌栓形成，个别大鼠肺内可见肝细胞癌转移灶，细胞形态和原发灶相似，可见病理性***相。2.2诱癌过程中肝脏bFGF的表达正常大鼠肝细胞bFGF表达为阴性，于诱癌第8周，肝小叶近门管区血管四周的少量肝细胞呈bFGF阳性表达，并可见门管区血管内皮细胞和成纤维细胞也呈bFGF阳性表达(图1)，随着诱癌进程的发

6、展，bFGF阳性肝细胞的数目逐渐增多。至诱癌第18周，癌结节内大部分肝癌细胞均呈bFGF阳性表达(图2)，bFGF免疫反应阳性产物为胞浆内棕褐色颗粒，但同一癌结节内的不同肝癌细胞bFGF的反应强度不一致，同只大鼠不同癌结节内bFGF的阳性肝癌细胞的数目和反应强度也有较大差别。图1DEN诱发肝癌第8周，肝脏bFGF免疫组织化学染色(ABC×４００)图2DEN诱发肝癌第18周，肝脏bFGF免疫组织化学染色(ABC×１００)3讨论碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgro发现bFGF能刺激肝癌细胞DNA合成，并进步其转移能力［４］。Ogasawara发现6个人肝癌细

7、胞株均表达bFGF和FGFR，将抗bFGF抗体加进培养基中，可明显抑制肝癌细胞的增殖，而加进bFGF则促进肝癌细胞增殖，从正反两方面证实了bFGF对肿瘤细胞的促增殖功能［５］。目前以为，除了bFGF对肿瘤细胞的促增殖功能，其促肿瘤血管天生功能在肿瘤的发生发展中亦起重要功能，并可能是bFGF参和肿瘤病理过程的主要途径。人结肠癌DLD细胞系不表达FGFR，在体外实验中对加进的重组人bFGF无反应，但在植进DLD细胞的***鼠模型中，注进重组bFGF，结果和对照组相比，不仅肿瘤体积增大，而且浸润到