大鼠肝癌发生过程中caspase3的表达及意义论文

《大鼠肝癌发生过程中caspase3的表达及意义论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、大鼠肝癌发生过程中Caspase3的表达及意义论文宁巍巍刘同慎李笑岩王东白咸勇【摘要】目的探讨Caspase3在肝癌发生发展中的作用和意义。方法应用免疫组织化学SP法，对二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌发生过程中Caspase3的表达进行了系统观察。结果①DEN诱发大鼠肝癌发生率为100%;②在正常大鼠肝脏、诱癌早期(1～8周)及诱癌中期(9～16周)可见少量肝细胞及枯否细胞呈Caspase3阳性表达,随着肝癌发生进程,Caspase3阳性枯否细胞数量增多，在癌结节中可见Caspase3阳性肝细胞，并且结节周边部比中央部阳性细胞多。结论本研究表明肝细胞Caspase3

2、的低表达和枯否细胞Caspase3的高表达可能与肝癌的发生和发展有关。【关键词】Caspase3;肝癌发生;免疫组织化学;大鼠【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionofCaspase3duringhepatocarcinogenesisinducedbydiethylnitrosamine(DEN)inratssystematically.MethodsTheexpressionofCaspase3easuredbyimmunohistochemicalSPmethod.Results①Theincidenceofhepa

3、tocarcinomainducedbyDENalratsandhepatomaratsentfor116berofkupffercellsexpressingCaspase3increasedprogressively，andthenumberofhepatocyesexpressingCaspase3inperipheryofhyperplasticnoduleorethanthatinthecentre.ConclusionTheresultssuggestthattheloentandprogressionofhepatoma.【Keymunohistochemist

4、ry,ratCaspases即富含半胱氨酸的天冬氨酸特异性蛋白酶，是一与细胞凋亡相关的蛋白酶家族.freel连续切片，HE染色，光镜观察。1.2Caspase3免疫组织化学染色兔抗大鼠Caspase3多克隆抗体购自北京博奥森公司，正常羊血清、兔二步法检测试剂盒购自北京中杉金桥公司，DAB显色试剂盒购自武汉博士德公司。采用SP法，主要步骤：3μm组织切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢甲醇处理30min灭活内源性过氧化物酶，柠檬酸缓冲液微波修复10min，正常羊血清封闭30min减少非特异性染色，滴加一抗4℃过夜，滴加二抗孵育30min，DAB显色，冲洗，脱水，透明，封片。2结果2.1

5、诱癌过程中大鼠肝脏的病理学变化诱癌早期(1～8周)肉眼观未见明显异常。镜下肝细胞肿胀，部分肝细胞呈嗜酸性变。肝小叶结构尚完整，小叶内可见灶性坏死伴炎性细胞浸润。诱癌中期(9～16周)肝脏表面出现弥散分布的灰白色结节。镜下嗜酸性或透明细胞增生灶，并逐渐形成肝细胞增生结节，结节内细胞异型性较小。诱癌晚期(17～25周)肝脏表面布满大小不一的灰白色结节，切面可见出血和坏死。镜检为肝细胞肝癌，呈梁索状或团块状向周围组织浸润，癌周组织细胞水肿、嗜酸性变，并有肝细胞增生。2.2诱癌过程中Caspase3的表达在正常大鼠肝脏、诱癌早期及诱癌中期偶见少量肝细胞及枯否细胞呈阳性表达(图1、2，箭头

6、示枯否细胞)，随着肝癌发生进程,Caspase3阳性枯否细胞数量增多，在癌结节中可见Caspase3阳性肝细胞，并且结节周边部Caspase3阳性肝细胞较中央部多，胞质内可见棕褐色阳性反应颗粒(图3、4，箭头示枯否细胞)。3讨论Caspase家族是一大类凋亡调节基因,是哺乳动物细胞凋亡的启动者和执行者。根据Caspase在蛋白酶级联切割反应中的作用位置,分为在上游调控其它Caspase活化的始动Caspase(Caspase1、2、4、5、8、9、10)和在下游直接介导凋亡实施的效应Caspase(Caspase3、6、7、14),其中Caspase3处于核心位置,发挥非常

7、重要的作用,被称为死亡蛋白酶，它的活性受到抑制，就会引起细胞凋亡障碍，并有可能进一步引起肿瘤的发生和发展。有学者采用临床原发性肝细胞肝癌患者的病理标本，用免疫组化法检测Caspase3的表达进行研究发现，Caspase3在正常肝组织、肝硬化、癌旁肝组织及肝癌(HCC)组织中阳性率分别为87.5%、84%、85%及60.4%，Caspase3在肝癌组织中表达明显低于癌旁组织1，提示Caspase3的生物活性在肝癌细胞中受到抑制，导致肝癌细胞凋亡难以产生;并且发现