tnfα在吸烟大鼠脑组织的表达及意义

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1、TNFα在吸烟大鼠脑组织的表达及意义：刘淑杰，柳忠兰，宋一晨，刘菲【摘要】目的：观察不同吸烟量大鼠脑组织TNFα的表达，初步探讨吸烟导致脑缺血的发病机制。方法：建立吸烟动物模型，将60只健康ethods：Animal　model　of　smoked　rats　ade，MethodHealthy　als　for　each　one.A　group(the　normal　control　group)，B　group(the　nonesmoking　control　group)，C　group(shorttime　smoking　gr

2、oup)，D　group(longtime　and　smalldose　smoking　group)，E　group(longtime　and　bigdose　smoking　group)，F　group(givingup　smoking　group).Theimmunohistochemicalmethodoking　can　elevate　the　expression　of　TNFα.oking　can　reduce　the　expression　of　TNFα.The　elevating　expression　of　

3、TNFα　may　be　one　of　the　oking　can　prevent　and　reduce　the　ICVD.AntiTNFα　maybe　a　neoking;rat;braintissue;TNFα　　肿瘤坏死因子α(TNFα)在缺血性脑血管病中的作用日益受到众多学者的重视[1]，现已证实TNFα能够刺激血管内皮细胞表达粘附分子，介导白细胞与血管内皮细胞的粘附。本实验通过大鼠吸烟模型，应用免疫组织化学方法对吸烟后大鼠脑组织中TNFα的表达进行了观察，探讨TNFα在吸烟引起脑血管病方面的可能机制，为缺血性脑

4、血管病的预防和治疗提供理论依据。　　1材料和方法　　1.1动物及分组健康成年×60　cm×58　cm的烟箱中，该箱上方有一通风口与外界相通，侧壁有一个与香烟直径相同的孔，点燃的香烟烟雾由侧壁孔处扩散至整个箱内，使箱内形成空气与香烟烟雾相混环境，大鼠在此环境中吸烟。实验用烟为市售某牌香烟，尼古丁含量1　mg/支，焦油含量18　mg/支。非吸烟对照组大鼠也同时被关进与“吸烟箱”规格、结构相同的箱内以相同时间，只是不输入香烟烟雾。　　1.3灌流固定及取材实验完毕后次日分别从各组随机取出10只大鼠，腹腔注射10%水合氯醛(350　mg/kg)麻

5、醉成功后，经左心室-主动脉用1%肝素化生理盐水150ml快速冲洗灌流，用4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液250　ml灌流固定，待固定充分后开颅取全脑置相同固定液中后固定。　　1.4石蜡标本的制备取距离额极6　mm处2　mm厚冠状脑片组织，常规进行水洗，材料脱水、浸蜡、包埋处理，入LKB8600超薄石蜡切片机上切取冠状脑片连续切片10张，厚度约5　μm，取相邻切片，分别行HE染色，TNFα免疫组化染色。各组大鼠选择切片的层面保持一致。　　1.5免疫组化染色采用免疫组化SABC法，兔抗大鼠TNFα抗体及SABC试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限

6、公司，操作步骤严格按说明书进行。　　2结果　　2.1光镜下TNFα阳性反应物表达情况(1)阴性对照脑切片无阳性反应物出现。(2)A组及B组有少量TNFα表达，二者比较无差异(P>0.05)。(3)C组：脑区TNFα表达与A组及B组比较明显升高(P<0.05)。(4)吸烟组：脑区TNFα表达与A组及B组比有显著升高(P<0.01)，E组表达最多，与C组及D组比较亦有显著差异(P<0.01)。(5)F组：脑区TNFα表达较A，B组表达升高(P<0.05)，但较C组及D组，E组表达减少，并有显著差异(P

7、<0.05)。　　2.2计数各组平均阳性细胞数在切片由皮质到白质依次观测5个不重复高倍视野(400×)，测出TNFα的阳性细胞数，各组数据以均数±标准差表示(表1)。表1吸烟对大鼠脑组织TNFα表达的影响　　3讨论　　吸烟是促进脑梗死形成的重要危险因素，吸烟引起缺血性脑血管病的确切机制不清楚，大量研究表明炎性细胞因子介导的炎性反应在脑梗死形成中起着重要作用[2]，研究吸烟后TNFα的变化对探讨吸烟引起脑梗死发病机制有重要意义。　　香烟燃烧的烟雾可分为气体和微粒两部分，其中主要的有毒复合物包括一氧化碳(CO)、尼古丁和焦油。尼

8、古丁和焦油等有害物质可直接损害血管内皮细胞，导致血管内皮功能失调[3]。尼古丁可使血管内皮细胞脱落。目前，普遍认为，血管内皮细胞不仅是血管腔内的一层保护细胞，而且有抗凝、抗血栓形成及纤溶等广泛生理功能，并且