沙眼衣原体质粒蛋白pgp3单克隆抗体制备及鉴定.pdf

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1、5doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2015．05．017沙眼衣原体质粒蛋白pglx3单克隆抗体制备及鉴定①贾晓晖周芳②赵霞李婷贾天军(河北北方学院医学检验学院，张家口075000)中图分类号11392文献标志码A文章编号1000-484X(2015)05-0659-04[摘要】目的：原核表达沙眼衣原体(Ct)质粒分泌性蛋白pgp3，制备其单克隆抗体(mAbs)并鉴定其基本生物学特征。方法：构建pGEX-6p2-pgp3原核表达载体，在大肠杆菌中表达GST-pgp3融合蛋白作为抗原免疫BALB／c小鼠，取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融

2、合，ELISA法筛选分泌抗pgp3蛋白mAbs的细胞株，对mAbs特异性、型别、类及亚类和效价进行鉴定。结果：GST-pgp3融合蛋白表达成功，且成功筛选出5株稳定分泌mAbs的杂交瘤细胞株，其中4株为分泌抗psp3mAbs的杂交瘤细胞株(p1B3、P2A1、P2B6、P2C2)，mAbs类型为Is~1／K型，剩余1株为分泌抗GST蛋白的杂交瘤细胞株(P3B4)，mAbs类型为IgG2b／K型。交瘤细胞株PIB3、P2A1、P2B6、P2C2、P3B4培养上清中的mAbs效价分别为1：6400、1：3200、1：12800、1：64OO和1：64O0。结论：成功制备出

3、抗pgp3mAbs，为进一步研究ct质粒蛋白pgp3功能及为ct检测方法的建立奠定了基础。[关键词】沙眼衣原体；分泌性蛋白；质粒蛋白；单克隆抗体Preparationandidentificationofmonocionalantibodiesagainstpglx3ofChlamydiatrachomatisJIAXiao—Hui，ZHOU，ZHAO0，12Ting，JIATian—Jun．CollegeofLabMedicine，HebeiNorthUniversity，Zhangfiakou075000，China[Abstract]Objectlve：Toex

4、presssecretedprotein—pgp3ofChlamydiatrachomatis(ct)plasmid，producemonoclonalantibodies(mAbs)andidentifytheirbasicbiologicalcharacteristics．Methods：ConstructionpGEX-6p2-pgp3prokaryoticexpressionvector，thenexpressedGsT-pgp3fusionproteininE．coliasantigenusedtoimmuneBALB／cmice．spleenceHswer

5、efusedwithSP2／0mousemyelomacells．ThehybridomacelllinesofscreeningmAbsweresecretedbyELISA，andmAbsspecificity，type，classandtiterwereidentified．Results：GST—pgp3fusionproteinwagsuccessfulexpressed，5strainsstablehybridomacelllinesthatsecretedmAbswerescreenedout，including4strainssecretedanti·

6、pgp3mAbs(P1B3，P2A1，P2B6，P2C2)，mAbstypewereIgGl／z，theotherstrainsecretionanti．GSTmAbs(P384)，mAbstypewasIgG2b／K．ThetiterofP1B3，P2A1，P2B6，P2C2，P3B4were1：6400，1：3200，1：12800，1：6400and1：64OOrespectively．Conclusion：Successfulpreparedanti-pgp3mAbs，andlayafoundationforfurtherstudythefunctionofC

7、tplasmidproteinpgp3andtheestablishmentofCtdetectionmethod．[Keywords]Chlamydiatrachomatis；Secretedprotein；Plasmidprotein；Monoclonalantibody沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis，Ct)是全球施。过去一直认为组织培养是Ct感染诊断的金标范围内最常见的性传播感染病原菌⋯，其感染多引准，但是该方法费时且存在误诊等风险，寻找和起男性尿道炎和女性子宫颈内膜炎，不及时治疗可建立新的诊断靶点以及诊断技术显得尤为重要