沙眼衣原体Tarp蛋白B细胞表位的预测与鉴定-论文.pdf

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1、第44卷第6期温州医科大学学报Vo1．44No．62014年6月JournalofWenzhouMedicalUniversityJun．2Ol4睽霸沙眼衣原体Tarp蛋白B细胞表位的预测与鉴定冯燕，朱珊丽，林晓去，薛向阳，李文妹，张丽芳(温州医科大学微生物学与免疫学教研室，浙江温州325035)[摘要]目的：预测并鉴定沙眼衣原体(Ct)Tarp蛋白的B细胞表位，为进一步研究Tarp蛋白的生物学特性及表位疫苗研制奠定基础。方法：利用生物信息学软件综合分析、预测筛选E血清型CtTarp蛋白的B细胞表位，获得6个潜在目的表

2、位。将人工合成的表位肽段与弗氏佐剂充分乳化，经背部皮下多点注射途径免疫BALB／c小鼠(每次100g／只，3只／组，共24只)，间隔2周，共免疫3次。采用ELISA法检测免疫小鼠血清中Tarp蛋白特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a，以及阴道分泌物中Tarp蛋白特异性sIgA抗体；进一步采用间接免疫荧光实验、免疫沉淀实验和Westernblot法检测表位免疫的血清抗体与Tarp蛋白结合的特异性。结果：筛选并鉴定了Tarp蛋白的一个免疫优势B细胞表位(aal71．186)，该表位可以刺激小鼠产生较高水平的Tarp

3、蛋白特异性IgG抗体和slgA抗体，且抗体亚类以IgG1为主。免疫荧光实验、免疫沉淀实验和Westernblot法检测结果显示，该段表位肽免疫血清抗体可特异性识别Tarp蛋白。结论：获得了CtTarp蛋白的一个免疫优势B细胞表位，为进一步研究Tarp蛋白的生物学特性及表位疫苗研制奠定基础。[关键词]沙眼衣原体；Tarp蛋白；B细胞表位；小鼠[中图分类号]R374[文献标志码]A[文章编号]1000-2138(2014)06-0395-06PredictionandidentificationoflinearB．cell

4、epitopeswithinTarpofChlamydiatrachomatisFENGYah．ZHUShanli。LINXiaoyun．XUEXiangyang,L1WenshuZHANGLifang．DepartmentofMicrobiologyandImmunology,WenzhouMedicalUniversity,Wenzhou，325035■圃咀Objective：TopredictandidentifytheB-cellepitopeofChlamydiatrachDm口t／sTarp．Methods

5、：TheaminoacidsequenceofTarpwasanalyzedusingcomputer-assistedtechniquestoscanB．cellepitopes．and6possiblelinearB-cellepitopespeptides(aa80．95，aal07．123，aal52．170，aal71．186，aa239．253andaa497．513)withhighpredictedantigenicityandhighconservationwereinvestigated．After

6、couplingtoKLH，thesyn-theticpeptideswereemulsifieldwimFreund’sadjuvant．Then．BALB／cmicewererandomlyassignedtoreceive(subcutaneousinjection)peptides-KLH，KLHorPBS(=3，100Ixg／time／mouse)，respectively,andthesameimmunizationschedulewasrepeatedtl1irdtimesata2-weekinterva

7、1．ELISAwasusedtodetecttheIgGandsub—typesIgG1，IgG2aintheseH．1maswellastheslgAinthevaginalsecretions．Furthermore，thespecificbindingofanti··seraproducedbyepitopesimmunizationtonaturalTarpantigenwasdetectedwithindirectimmunofluo-rescenceassay(IFA)，immunoprecir’itate

8、dandWesternblotanalysis，respectively．Results：TheepitopepeptideF4(aal71-186)wasabletoinducesignificantTarospecificantibodyIgGinserllmandslgAinvaginalwashascomparedwith