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1、沙眼衣原体pORF8质粒蛋白的表达及其单克隆抗体的制备与鉴定*粟盛梅I,李忠玉严,黄秋林彳,钟光明S周洲1,陆春雪】（1.南华大学病原生物学研究所,衡阳421001；2•南华大学第一附属医院,衡阳421001；3.徳州人学圣安东尼奥健康科学研究中心，徳州78229）【摘要】目的表达沙眼衣原体pORF8质粒蛋白，帘胎其单克隆抗体（mAb）,并鉴定其生物学特征。方法克隆表达pORF8融合蛋白并免疫小鼠制备致敏的脾淋巴细胞，脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞株；免疫荧光实验（IFA
2、）筛选稳定分泌抗pORF8蛋口mAbs的阳性细胞株并鉴定mAbs抗体类型；ELISA法测定mAbs效价；IFA、westernblot鉴定mAbs特异性。结果筛选出3株稳定分泌特异性抗pORF8mAb的杂交瘤细胞株，分别为5C2、12C7、12F8；抗体类型分别为IgM、IgG3、IgG3；杂交瘤细胞培养上清的抗体效价分别是1：2048、1：512、1：1024；12C7>12F8mAbs能同时特异性识别GST-pORF8.RFP-pORF8融合蛋白，但5C2仅识别GST-pORF8融合蛋口，而
3、不识别RFP-pORF8融合蛋白。结论成功获得了3株分泌pORF8mAbs的细胞株，为研究pORF8质粒蛋白结构和功能及建立特界敏感的沙眼衣原体检测方法夷定了基础。【关键词】沙眼衣原体；pORF8质粒蛋白；单克隆抗体*【基金项目】国家口然科学基金（30970165、81102230）；湖南省高校科技创新团队资助项目（湘教通12010J212号）**【通讯作者】李忠玉，Email:lzhyl023@hotmail.com【作者简介】粟盛梅（1971・），女，副教授，主要从事衣原体致病机制研究。Ex
4、pressionofpORF8plasmidproteinofChlamydiatrachomatisandPreparation,identificationofmonoclonalantibodiesagainstpORF8SuSheng-meiLiZhong-yu1,HuangQiu-lin2,ZhongGuang-ming3,ZHOUZhou1,LUChun-xue1(7.PathogenicBiologyInstitute.UniversityofSouthChina,Hengyan
5、g421001,China;!.FirstAffliatedHospitalofUniversityofSouthChinafHengyang421001,China.3.DepartmentofMicrobiologyandImmunology,UniversityofTexasHealthScienceCenteratSanAntonioJX78229tUSA)[Abstract]ObjectiveToexpresspORF8plasmidproteinofChlamydiatrachoma
6、tisandidentifythemonoclonalantibodiesagainstpORF8plasmidprotein.MethodspORF8fusionproteinwasexpressedinE.coliXL1Blueandpurifiedwithglutathione-conjugatedagarosebeads,thenthepurifiedproteinwasusedtoimmunizeBALB/cmice,thespleencellsisolatedfromtheimmun
7、izedmicewerefusedwithSP2/0myelomacellstogeneratemonoclonalantibodiesagainstpORF8protein.Immunofluorescenceassay(IFA)wasperformedtoscreenthepositivehybridomacellsandidentifytheantibodyisotypes.ThetiterofthemAbswasdeterminedbyenzyme-linkedimmunosorbent
8、assay(ELISA).AndthespecificitywascharacterizedbyIFAandWesternblot.ResultsThehybridomacelllines,named5C2,12C7and12F&stablysecretingspecificmAbsagainstpORF8wereobtained,thetiterofthreemAbsfromcellculturewere1:512,1:2048and1:1024respectively.ThemAbsecre
