青蟹双顺反子病毒-1原位杂交检测方法的建立与应用.pdf

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1、130广东农业科学2015年第11期青蟹双顺反子病毒一1原位杂交检测方法的建立与应用崔亚婷一，倪军，马红玲，许海东，冯娟，申亚阳，2郭志勋(1．中国水产科学研究院南海水产研究所，农业部水产品加工重点实验室，广东广州510300；2．上海海洋大学水产与生命学院，上海201306；3．广东省水生动物疫病预防控制中心，广东广州510222)摘要：根据青蟹双顺反子病毒一1(mudcrabdicistrovirus一1，MCDV一1)基因的保守序列设计1对引物，从感染MCDV一1的青蟹鳃组织中提取RNA为模板进行RT—PCR扩增，得到1

2、314bp的cDNA片段。纯化后的PCR产物用地高辛(DIG)标记制备核酸探针，此探针与青蟹呼肠孤病毒(MCRV)、鲍肌肉萎缩症病毒(AbSV)、类疱疹病毒(AbHV)、白斑综合症病毒(WSSV)、虎纹蛙病毒(TFV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)等水生动物常见病毒均无交叉反应，可以特异性的检测出MCDY一1，检出MCDV一1的灵敏度为8．58x10’copies／~L。采用原位杂交检测方法检测拟穴青蟹组织中MCDV一1的组织分布，结果表明，拟穴青蟹中MCDV一1RNA的阳性信号主要分布于肝胰腺、神经节、肠道和食管。关键词：拟穴青蟹

3、；青蟹双顺反子病毒一1；地高辛核酸探针；原位杂交中图分类号：$945．6；Q819文献标识~i-q：A文章编号：1004—874X(2015)11—0130—05Developmentandapplicationofaninsituhybridizationassayfordetectionofmudcrabdicistrovirus-1CUIYa—ting'，NIJun，MAHong—ling，XUHal—dong，FENGJuan，SHENYa—yang2GUOZhi—xurt(1．KeyLaboratoryofAquat

4、icProductProcessing，MinistryofAgriculture~SouthChinaSeaFisheriesResearchInstitute，ChineseAcademyofFisherySciences，Guangzhou510300，China；2．CollegeofFisheriesandLifeScience，ShanghaiOceanUniversity，Shanghai210306，China；3．GuangdongProvincialAquaticAnimalEpidemicDiseaseP

5、reventionandControlCenter，Guangzhou510222，China)Abstract：Mudcrabdicistrovirus一1wasisolatedfrommassivedeathsofmudcrabandhadastrongpathogenicity．BasedontheMCDV一1genomesequences，wedesignedapairofprimersandobtaineda1314bpfragmentofMCDV-1genebyRT—PCR．Consequently，probewa

6、spreparedusingDIG—labeling．Thesensitivityandspecificityofprobewereanalyzedbydotblothybridizationmethod．Resultsshowedthatthisprobecoulddetectaminimumof8．58x10copies／~LofMCDV一1andwasspecificforMCDV一1detection，withoutcross—reactionwithMCRV(mudcrabreovirus)，AbSV(abalone

7、shrivelingsyndrome—associatedvirus)，AbHV(abalponeherpesvirus)，WSSV(whitespotsyndromevirus)，TFV(tigerfrogvirus)andKHV(Koiherpesvirus)．ThisprobewasusedtodetectMCDV-1indifferenttissuesofdiseasedmudcrabbyinsituhybridizationandpositivesignalsofMCDV-1weremainlyobservedinh

8、epatopancreas，ganglion，intestinesandesophagus．Keywords：Scyllaparamamosain；mudcrabdicistrovirus一1：dig—labeledprobe；insituhybridization拟穴青蟹(