温度对青蟹双顺反子病毒-1和呼肠孤病毒增殖的影响以及病毒的组织分布

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1、学校代码：10264研究生学号：M120104134上海海洋大学硕士学位论文题目：温度对青蟹双顺反子病毒-1和呼肠孤病毒增殖的影响以及病毒的组织分布EffectofTemperatureonthe英文题目：ProliferationofMudcrabDicistrovirus-1andReovirusandtheirTissuedistribution专业：临床兽医学研究方向：渔业病害防治姓名：崔亚婷指导教师：郭志勋研究员二O一五年五月上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取

2、得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密

3、■学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注答辩地点答辩日期上海海洋大学硕士学位论文温度对青蟹双顺反子病毒-1和呼肠孤病毒增殖的影响以及病毒的组织分布摘要拟穴青蟹（Scyllaparamamosain）是中国东南沿海一种广温广盐性海产蟹类，具有重要的经济价值，是我国的传统养殖品种。青蟹双顺反子病毒-1（Mudcrabdiscistrovirus-1,MCDV-1）和青蟹呼肠孤病毒（MudCrabReovirus,MCRV）是拟穴青蟹养殖过程中发现的两种重要病原体，具有较强的侵染性，给青蟹养殖业带

4、来了巨大的经济损失。本文利用实时荧光定量PCR检测方法研究了温度对这两种病毒在青蟹体内增殖的影响以及两种病毒在青蟹不同组织中的增殖规律；建立了MCDV-1的原位杂交检测方法并利用该检测方法对MCDV-1在拟穴青蟹体内的分布进行了定位。本研究将拟穴青蟹分别养殖在24℃、27℃、31℃和35℃的玻璃缸中，每个温度均设置人工感染组和自然感染组。人工感染组注射病毒粗提液进行人工感染，自然感染组不进行处理。在攻毒后第0h、1h、4h、6h、12h、24h、36h、48h、60h、72h和90h时从各组中抽取5只拟穴青蟹的血淋巴，利用荧光定量PCR检测血淋巴中MCDV-1和MCR

5、V的含量，统计分析后发现：所有温度的人工感染组和自然感染组中的MCDV-1在攻毒后第24h-36h时增殖迅速，人工感染组中31℃7的MCDV-1增殖速度最快，病毒量最多时可达1³10copies/ngRNA，而其他温度5下MCDV-1含量最高只能达到1³10copies/ngRNA，且含量多少依次为35℃＞24℃＞27℃；自然感染组中所有温度的MCDV-1增殖速度相近且病毒量最多时均5只达到1³10copies/ngRNA，病毒量多少依次为27℃＞35℃＞31℃＞24℃。MCRV的波动比较频繁，总体来说，35℃的人工感染组和自然感染组中，MCRV达到峰5值的时间点分别

6、在攻毒后的第1h和第6h，病毒量最高可达1³10copies/ngRNA，之后开始下降并趋于稳定；人工感染组中，24℃、27℃和31℃增殖规律相似，并5在攻毒后第48h时达到峰值，病毒量可达1³10copies/ngRNA，多少依次为31℃8＞27℃＞24℃；在自然感染组中，27℃的病毒量最高可达1³10copies/ngRNA，I上海海洋大学硕士学位论文7631℃的病毒量最高可达1³10copies/ng，24℃的病毒量却只能达到1³10copies/ngRNA。拟穴青蟹的死亡情况统计发现，在人工感染组中，24℃和31℃的拟穴青蟹于攻毒后第12h出现死亡现象，27℃

7、的拟穴青蟹则在第24个小时开始死亡；在12h-72h之间，死亡率大小依次为31℃>24℃>27℃，72h后27℃的死亡率赶超另外两个温度组，35℃条件下拟穴青蟹快速死亡的原因不排除是应激的影响，不具有意义；在自然感染组中，出现死亡现象的快慢依次为31℃、27℃和24℃，且在整个试验进程中31℃的死亡率均高于其他三个温度组，35℃的拟穴青蟹没有发生死亡现象。将拟穴青蟹养殖在30℃的玻璃缸中，用相同的方法进行人工感染，在攻毒后的0h、12h、24h、36h、60h和90h，分别从人工感染组和自然感染组中采集拟穴青蟹的鳃、肝胰腺、心脏、神经节、肌肉和血淋巴