禽呼肠孤病毒感染对鸡法氏囊及免疫应答的影响

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1、!"卷#期微生物学报!（"#）：!’$(!’"$%%"年&月!日!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$!)*+,$%%"!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!禽呼肠孤病毒感染对鸡法氏囊及免疫应答的影响2，$2"22王蕾，崔治中，孙爱军，孙淑红（2山东农业大学动物科技学院泰安$"2%20）（$齐鲁动物保健品有限公司济南$-%2%%）摘要：研究CD株禽呼肠孤病毒（EFG）感染2日龄HI3鸡后对法氏囊发育影响，对传染性法氏囊病毒（JKLG）、禽流感病毒（EJG）、新城疫病毒（MLG

2、）疫苗免疫诱发的抗体的影响，及对强毒株JKLG致病作用的影响。结果表明，CD株EFG感染2日龄HI3鸡可引起法氏囊萎缩和部分淋巴细胞减少，但对增重及EJG和MLG疫苗免疫后抗体滴度却没有显著影响。EFG感染可降低弱毒JKLG疫苗免疫后的抗体反应，但对随后JKLG强毒株攻毒的抵抗力却与对照鸡无显著差异。经JKLG弱毒疫苗免疫后，再接种强毒株JKLG，不会引起死亡，但却仍能显著抑制对EJG、MLG疫苗免疫后的抗体滴度。然而，对于2("日龄经EFG感染的鸡，JKLG强毒的这种免疫抑制作用又显著低于未经EFG感染的对照鸡。关键词：呼肠孤病毒；传染性法氏囊病毒；法氏囊；抗体反应中

3、图分类号：H0-$N&-文献标识码：E文章编号：%%%21&$%’（$%%"）%#1%!’$1%&禽呼肠孤病毒（EO84+P,BO8P*<，EFG）属于呼肠孤!"!"#试验鸡：2日龄京白HI3鸡$-’只，购自济南病毒科（F,BO8P8=4,）正呼肠孤病毒属（QPRABP,BO8P*<）的HIE3EH公司。饲养在HI3动物房带过滤空气的隔［2］成员之一，是2%节段的双链FEM病毒。2’-!年，离罩中。HI3鸡胚购自济南HIE3EH公司，由本实验EFG首先从患病鸡的消化道和呼吸道中分离到，随室孵化。［$］后从患关节炎的病鸡中分离到。EFG可引起多!"!"$免疫用疫苗：JKL

4、G中等毒力活疫苗（K0"株，种疾病，常见的有病毒性关节炎S腱鞘炎、吸收障碍批号：%-2%%!$），齐鲁动物保健品有限公司生产；［#(’］综合征、免疫抑制等，同时EFG可以增加其他MLG灭活疫苗（批号：%!’$20），因特威生产；EJG灭［2%，22］疾病的易感性和致病性。EFG在世界范围内活疫苗（T-、T’亚型，批号分别为%-%&%%$，广泛存在，流行于鸡、火鸡、鸭和其他禽类。国内自%-%&%%2），齐鲁动物保健品有限公司生产。MLG、［2$］王锡坤（2’0-）首次证实我国存在本病以来，相继EJG灭活抗原由齐鲁动物保健品有限公司提供。分离到多株EFG。现在国内各鸡场中本

5、病的感染!"!"%试剂和仪器：测抗JKLG抗体试剂盒购自［2#］已经相当普遍。JL6UU公司；F.1IVF反应试剂盒，.FJ9B/FME抽提［-，"，2!］EFG血清型众多，致病性各异，但对免疫试剂盒，凝胶回收试剂盒购自宝生物工程（大连）有抑制方面的报道不多。为对EFG在免疫抑制方面限公司；连接试剂盒，氨苄青霉素、低分子量蛋白的作用有进一步的了解，我们进行了EFGCD株对W4PX,P为美国IPB7,Y4公司产品；限制性内切酶鸡法氏囊及免疫应答的影响。!"#F!和$%&!购自上海生工生物工程有限公司；其它试剂均为分析纯试剂；EFG（H22##株）单因子血!材料和方法清由中

6、国农业大学赵继勋教授惠赠。!"!材料!"!"&引物设计：参照Z,+K4+X中EFGH22##株的!"!"!病毒：鸡呼肠孤病毒CD株，$%%!年从山东H2基因序列（序列号E3##%"%#），利用IP87,P设计一临沂某种鸡场分离，患病鸡有明显的关节炎症状。对引物，用于扩增CD株EFG的"V基因。引物由上病毒从患关节炎病鸡的关节囊中分离。所用病毒已海H4+YB+公司合成，序列为：3：-[1VEEZEE..VZZ经无限稀释法#次纯化。.V.VEE.VVE.VZVEZ1#[，F：-[1..EZ.VZEV..EZZ.基金项目：国家自然科学基金重点项目（#%##%!-%）"通讯作者

7、。.,/：0&1-#010$!2-&%；345：0&1-#010$!2!2’；61748/：99:*8;<=4*>,=*>:+作者简介：王蕾（2’&"?），女，山东海阳人，高级工程师，在读博士生，主要从事禽病和分子病毒学研究。61748/：/8/@�-;@4ABB>:B7>:+收稿日期：$%%&1%’12’；接受日期：$%%&12%1$%；修回日期：$%%&1221%!王蕾等：禽呼肠孤病毒感染对鸡法氏囊及免疫应答的影响U/微生物学报（,--?）Q（?&）Q4&!"#!$"!##!!"$%&’。程度萎缩的淋巴滤泡照相后，作为判定其它样品