重组禽呼肠孤病毒S1133 σ3基因表达及其免疫原性研究.pdf

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1、南方农业学报J0uRNAL0FsouTHERNAGRICuIJuRE2012，43(8)：1223—1226ISSN2095—119l：CODENNNXAABhttp：，／www．IlI'nyxb．comDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2012．08．1223重组禽呼肠孤病毒S1133盯3基因表达及其免疫原性研究谢志勤，谢芝勋+，刘加波，庞耀珊，邓显文，谢丽基，彭宜，范晴(广西兽医研究声斤／广西畜禽疫苗新技术重点实验室，南宁530001)摘要：【目的】构建禽呼肠孤病毒(ARv)s1133叮3基因的真核重组质粒，研究其表达蛋白的免疫原性，为研发ARv基因疫苗奠定基础。

2、【方法】采用RT—PcR对ARvs1133毒株的盯3基因进行RT—PcR扩增，扩增产物与真核表达载体pcDNA3．1(+)连接后，转化大肠杆菌DH5d，然后提取重组质粒的DNA，经双酶切、PCR扩增鉴定和纯化。以阳性重组质粒pcDNA3．1一盯3免疫7日龄sPF雏鸡，同时设灭活sll33、表达叮3蛋白及生理盐水对照，二次加强免疫两周后，采用westemblotting检测鸡群血清抗体；并用s1133毒株进行攻毒，4d后进行ARv检测。【结果】重组质粒pcDNA3．1一盯3的双酶切和RT—PcR扩增鉴定结果一致，均能扩增出约999bp目的条带；免疫攻毒试验结果表明，pcDNA3．1一仃3处理、

3、灭活s1133处理、表达盯3蛋白处理和生理盐水处理的病毒检出率分别为7．4％、3．7％、11．1％和29．6％，pcDNA一盯3处理与生理盐水处理的差异显著(P<0．05)，但与灭活s1133处理、表达盯3蛋白处理的差异不显著(P>0．05)；病毒检出部位最高是关节，其次是胸腺和肾脏，胸腺检出率为零。【结论】真核表达ARvs1133盯3蛋白具有较好的免疫保护，可作为免疫抗原进行下一步的疫苗中和试验。关键词：禽呼肠孤病毒；s1133毒株；盯3基因；重组质粒；免疫原性中图分类号：S852．659．4文献标志码：A文章编号：2095—1191(2012)08—1223—04Expressionof

4、o-3geneinrecombinedavianreovirusS1133andJ土XDreSSlonoIo’jgenelnreC0mDlnenaVlanre0VlrUSSlljjand■J■●■1ltslmmunogenlcltyXIEZhi—qin，XIEZhi—Xun4，UUJia_bo，PANGYao—shan，DENGXiaIl—wen，XIELi_ji，PENGYi，FANQing(Guang)【iVeterinaryResearchInstitute，Guan黔iKeyLaboratoryofAnimalVaccineandNewTechnolog)r，Nanning53000

5、1，China)Abstract：【0biective】Eukaryoticrecombinantplasmidofa“anreovims(ARV)S1133盯3genewasconstmctedtostudyitsimmunogenicityandprovidereferencesfordevelopingARVgenevaccine．【Met}lod】7111e盯3geneofavianreovimswasampli6edwiththespeci6cprimersbyRT—PCR．Theamplifiedproductf南mRT—PCRwaspurifiedandligatedwitIl

6、pcDNA3．1(+)vectorandthentransferredintoE．co“DH5仅．DNAoftherecombinantplasmidwasextractedandidentifiedbydoublerestrictionendonucleaseanal丫sis，PCRassay，andDNAsequencing．PositiverecombinantDlasmidpcDNA3．1一盯3wasiniectedinto7一olddavsSPFchickasavaccine．IncontIast，thesameprDteinf南mthree}∞ups池，inactiveS1133

7、，盯3pmtein，andsalinewereiniected．Twoweeks觚erthesecondiniection．chicksemmantibodvwasdete瑚inedusingWestemblotting．Thechickfmmfour鼬oupswereiniectedwithreovimsS1133strain，andfourdavslaterARVde．tectionwasconducte