鸽胚胎成纤维细胞系的构建及生物学特性研究.pdf

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1、试验研究鸽胚胎成纤维细胞系的构建及生物学特性研究焦亚军，杨青春，李和森，晋高伟，崔欢，高鹏飞★(山西农业大学动物科技学院。山西太谷030801)摘要：(目的)为了研究鸽肌肉发育特点，本试验采用组织贴壁法成功培养白羽王鸽成纤维细胞系。【方法)本研究选用白羽王鸽第10日龄胚胎的腿部肌肉组织，采用组织块贴壁培养法进行原代细胞培养，在原代培养第3天开始进行细胞计数，建立其生长曲线，通过细胞冻存和复苏分析细胞活力。(结果)结果表明，贴壁后的细胞呈特征的梭型，多星型，彼此间紧密连接，生长状态良好，细胞生长曲线呈“s”型。细胞复苏率达到

2、80％~2上。(结论)通过组织块培养法，已成功建立白羽王鸽鸽胚的成纤维系，为深入研究与鸽肌纤维发育相关的基因功能提供良好的实验平台。关键词：白羽王鸽；成纤维系；组织块培养法DoI：10．3969／J．ISSN．1671-6027．2015．06．013鸽子在日常生活中较为常见，其广泛分布在世界各地，小块均匀的平铺于培养瓶底，倒置贴壁4—6h后加入含10％属于脊椎亚门、鸟纲、鸽形目、鸠鸽亚目、鸠鸽科、鸠鸽亚科、胎牛血清培养基，置38℃，5％CO培养箱培养。鸽属，全世界有50多个古老的鸽子品种。肉鸽不仅肉质细1．3．2胚成纤维

3、细胞的传代培养待培养的细胞汇合到嫩、味道鲜美，而且是高蛋白、低脂肪的食品，营养价值高，很85％左右时，即可传代。弃去培养基，用37℃含双抗的PBS清适合人体的营养需要，是一种高级滋补佳品，同时具有较高洗细胞2-3次后，加入O．25％胰蛋白酶消化。当细胞胞质回的药用价值，素有“一鸽胜九鸡，无鸽不成席”的美誉。鸽肉具缩，细胞间隙增大时，加入适量完全培养基，以终止胰酶的消有特殊的药用功效，素有“动物人参”之称，含有一种称为血化，吹打细胞。按1：2或1：3的比例传代培养，根据细胞生长红蛋白质的营养物质，对产妇以及手术病人的伤口愈合

4、有相和代谢情况及时更换培养液。利用细胞差速消化的特点，通当好的促进作用。中成药“乌鸡白凤丸”中的白凤，就是采用过传代培养逐渐纯化成纤维细胞。鸽的肉和骨制成的。1．3．3鸽胚成纤维细胞的冻存培养的细胞生长至对数期成纤维细胞是结缔组织中较常见的细胞，其主要特征是即可冻存。用胰酶消化细胞并收集细胞悬液，lO00rpm，离心生长旺盛，细胞核较大，在显微镜下容易观察，且呈现典型的8rain，去上清，收集细胞。加适量冻存再用吸管轻轻吹打使细梭形、星型或多边形，胞核为卵圆形。本研究采用组织块培养胞重悬。分装入无菌冻存管中，每管1—1．2

5、mL细胞悬液，加入法培养鸽胚胎期肌肉成纤维细胞系，以期为鸽或其它禽类肌15％DMSO，做好标记，4℃放置30rain，一20℃冻存2h，一肉发育机理的相关研究提供研究基础。70％冰箱过夜，次日放人液氮中保存。1材料与方法1．3．4鸽胚成纤维细胞的复苏液氮中冻存7d后，取出冷冻管。迅速在37~C温浴中解冻，待融化完全后，1200rpm，离1．2主要试剂DMEM(Hyclone)、胎牛血清(Hyclone)、0．25％心5min；除去上清，再加入新配置的培养液，用枪头吹打使之胰蛋白酶(上海江莱生物科技有限公司)、DMSO(Si

6、ma)、双抗重悬。后置于培养瓶中，于38~C，5％C0培养箱培养。(Gibc~、EDTA(天津市凯通化学试剂有限公司)、L一谷氨酰胺1．4细胞生长曲线的绘制取对数生长期细胞，采用常规消(北京格林博远生物科技有限公司)、生理盐水、EDTA。化的方法制得细胞悬液，计数。根据结果将细胞稀释至1×1．3培养方法10个／mL，每孔lmL接种于24孔细胞培养板中，38％培养。1．3．I鸽胚成纤维细胞的原代培养将10日龄的鸽胚在无从接种时间算起，每隔24h，取3孑L细胞进行细胞计数，连续菌条件下取出，分离腿部肌肉，用含有l％双抗的PBS

7、中漂洗计数至细胞密度降低为止。将所得数据绘制成细胞数一时间4～5次，然后用眼科剪剪切组织块成lmm。左右大小。将组织细胞生长曲线。2结果与分析作者简介：焦亚军(1990-)，河北省邢台人，本科，生物科学2．1原代细胞形态观察鸽成纤维细胞形态多为梭形或不(动物方向)专业规则形，细胞贴壁后呈长梭形，胞核位于中央，胞质外伸出少★通讯作者：高鹏飞(1980-")，博士，副教授，山西省太谷县量长短不一的突起，生长时呈放射状、漩涡状走向。组织块经人，研究方向：分子遗传与动物育种过3d的培养，可见细胞沿组织块边缘向外游离，每间隔24h基

8、金项目：山西农业大学大学生科技创新项目(12-39)资助；观察细胞生长状况，培养大约8d后，细胞铺满瓶底，胞质突山西省青年科技研究基金(2012021028—2)出，核仁清晰，长梭形细胞占主要优势(见图1o2015年第06期●