牛成纤维细胞库的建立与生物学特性的研究

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1、摘要本实验采州组织块贴壁培养法，构建了鲁曲黄牛、皮埃蒙特牛有限成纤维细胞系。并对所建细胞系进行了生物学特性研究与分析。本实验所培养的细胞具有典型的成纤维形态：所培养细胞早梭形或不规则三角形，有数个长短不一的突起，细胞丰满；细胞核形态为卵圆形，并位丁胞质中央，核t：清晰。两种牛成纤维细胞人小不一致，且形态存在差异。对丁-所建细胞系，细胞冻存代数在4代以内，冻存密度为3×106／ml。鲁两黄牛的样本含姑为8，冻存管数为40支；皮埃蒙特牛的样本含堵为2，冻存管数为31支。细胞复苏后活率较冻存前有所F降．这表明细胞在冷冻、复苏过释中可能

2、受到一定的损伤。但活率均在90％以上。所±镕养细胞在体外的生K增殖过科甲⋯S’刑，经历了}许伏期、指数增生期和平顶期三个阶段，符合细胞在体外生I王=的一般规律。在对所建细胞系进行微生物检测时，我们对细胞污染中常见的细凶、真卤、病毒及支原体污染进行分析，坌占果均为I掘性，表明培养物术受剑细凶、真菌、病毒及支原体的污染。对于所建细胞系，尤其是以保种为目的所构建的细胞系，遗传特性的稳定1}常重要。因此对细胞系遗传稳定性的评估是一项必要的指标。本实验对培养物进行染色体分析得山：通过对鲁西黄牛上j皮埃蒙特牛100个分裂相的观察，二倍体染色

3、体数为2n=60：染色体形态术见异常；两个牛I}占种的Ⅱ二倍体与多倍体的出现率均不超过13％．表明细胞在体外培养时遗传性能稳定；不存在种间的交义污染。通过对染色体的核型分析，为物种鉴定提供理论依据。同l：酶分析己被J“泛的麻州丁物种分析．冈此本实验对所建细胞系进行了乳酸脱氢酶(LDH)与苹果酸脱氢酶(MDH)的酶谱分析，表明不同物种各节现其独特的条带．具有种属特异性。通过比较研究，得山细胞系之间不存在交义污染的现象。本实验所构建的成纤维细胞系符合ATCC的要求，成功的构建了两个牛鼎种的有限成纤维细胞系，达剑了备禽遗传资源在细胞水

4、平上K}{『】保存的目的；并开辟了物种保存的新途径，措建了我国备禽遗传资源细胞席构建和生物学特性研究的技术平台，为全国备禽遗传资源在细胞水平的保存和研究提供技术与理论支持：为多方面的科学研究提供了宝贵实验材料。关键词：牛成纤维细胞核删分析同I：酶分析EstablishmentandCharacteristicsofCattleFibroblastCel1LinesGuoYuDirectedbyAssociatePro．LaiSongJiaPro．GuanWeiJunAbstractThefinitefibroblasteel1i

5、nesoftheearmarginaltissuesofLuxicattleandPiemonteseboyineweresuccessfullyconstructedbydirectadherentcu[turemethods．ThecenlineswereanatyzedaccordingtoLhereques￡forsettingupeell1ine．Theculturedcetls’morpbaistypicalfihroblastThroughmicroscopethemorphadiversityoffibrobia

6、stifldifferentbreedscanheobserved．Theeellswerepassagednomorethan4generations．Theeellfreezingdensityisabout3×10“／m1．SamplesizeofLuxicattleis8andampoulesare40：SamplesizeofPiemontesebovineis2andampoulesare31．Thecellsurvivalratedescendedaftercryopreservation．Thisshowedth

7、eeellwasinjuredduringcryopreservationandrevivalThegrowthCurveofculturecell，nvitroappeared⋯S’shapeandi“ustt’atedthatce]lsgrowingincludedlatentphase，logarithmicgrowthphaseandstagnatephase．Theresu】tofmicrobialdetectjonshowedthatbacteria，lungj，virUSandmycoplasmadidnotcon

8、taminateculturedcells．Thehereditary—character—stableisimportantforeell1ines，especiallyforspeciesconversation．Sochromosomeanalysisis