甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2（MASP-2）的CUB1、CUB2片段多克隆抗体的制备及鉴定.pdf

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1、细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmune1)2015，31(5689·论著·文章编号：1007—8738(2015)05-0689一o4甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)的CUB1、CUB2片段多克隆抗体的制备及鉴定韩小东，贾天军，贾晓晖，李婷，赵霞(河北北方学院医学检验学院病原生物与免疫学研究所，河jE张家El075000)[摘要】目的原核表达甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)的CUB1、CUB2功能区蛋白，制备其功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定。方法利用带有CU

2、B1、CUB2基因片段的pGEX-6P-2原核载体诱导表达GST—CUB1和GST·CUB2融合蛋白并进行纯化，将纯化后的融合蛋白作为抗原，与Freund佐剂充分混合后免疫5周龄BALB／c雌性小鼠，制备多克隆抗体；应用Westernblot法检测多克隆抗体特异性，应用ELISA检测多克隆抗体效价。结果成功表达并纯化GST-CUB1和GST．CUB2蛋白；应用其作为抗原对小鼠进行免疫后，成功制备出与其相应的多克隆抗体，且特异性强，与其他蛋白无交叉反应；间接ELISA测得CUB1抗体效价大于1：32000，CUB2抗体效

3、价大于1：16000。结论成功制备了特异性强，效价高的GST．CUB1和GST．CUB2蛋白多克隆抗体。[关键词]MASP-2；CUB1和CUB2功能区片段；蛋白原核表达；多克隆抗体[中图分类号]R392．11，Q786[文献标志码]APreparationandidentificationofpolyclonalantibodiesagainstCUB1andCUB2functionaldomainsfrommannan-bindinglectin·associatedserineprotease-2HANXiaod

4、ong，JIATianjun，JIAXiaohui，LITing，ZHAOXiaInstituteofPathogenBiologyandImmunology，SchoolofLaboratoryMedicine，HebeiNorthUniversity，Zhangjiakou075000，China『Abstract]ObjectiveToexpressCUB1andCUB2functionaldomainproteinsOfmannan-bindingIectin-associatedsenneprotease-2

5、(MASP-2)byprokaryoticexpressionsystem，andfurtherprepareandidentifythepolycIonalantibodiesagainstthesetwodomains．MethodsThepGEX-6P-2prokaryoticvectorcarryingthetargetgeneCUB1andCUB2wasusedtopreparetherecombinantproteinGST．CUB1andGST-CUB2．Thesetwofusionproteinswer

6、epurifiedwithGlutathioneSepharose“4BbeadsandthencombinedwithFreund’sadjuvantasantigenstoimmunizetheBALB／cfemalemiceaged5weeksforgeneratingpolyclonalantibodies．Subsequently，thespecificityofthepolyclonalantibodieswasdetectedbyWesternblotting．andthetiterwasdetermin

7、edbyindirectELISA．ResultsThefusionproteinsGST-CUB1andGST·CUB2weresuccessfulyexpressedandpurified．Theirpolyclonalantibodiesweregainedfr0mtheBALB／cmiceimmunizedwiththesetwoproteins．Thepolyclonalantibodiesshowedhighspecificitywithnocross-reactionwithotherproteins．I

8、ndirectELISAindicatedthatthetiterofanti．CUB1antibodywasmorethan1：32000andanti-CUB2antibodywasmorethan1：16000．ConclusionThepolycIonalantibodiesagainstGST-CUB1andGST-CU