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《人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶n端片段的原核表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2N端片段的原核表达 免疫学杂志 第23卷 第3期 2007年5月 IMMUNOLOGICALJOURNALVol.23No.3May.2007・235・[文章编号]100028861(2007)0320235204人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2N端片段的原核表达3蔡学敏,左大明,赵 娜,张丽芸,陈政良(南方医科大学免疫学教研室,广州510515)[摘 要] 目的 在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)N端片段。方法 应用PCR技术从含人MASP2cDNA的质粒pGEM2MASP2中扩
2、增MASP22N端基因片段,将其克隆至pGEX4T1521原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP22N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS2PAGE和Westernblot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与MBL2CLR结合的活性。结果 从pGEM2MASP2中扩增得到约840bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4900bp和840bp片段,测序结果与预期的完全一致。纯化蛋白经SDS2PAGE可见Mr60000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL2CLR蛋白结合。结论 获得了表达人MASP2N端片段的
3、大肠杆菌菌株和重组人MASP2N端片段ΠGST融合蛋白,为MASP2分子的进一步研究提供了条件。[关键词] 甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2;N端片段;原核表达[中图分类号] R392.1 [文献标识码] AProkaryoticexpressionoftheNterminalfragmentofserinepro2tease22CAIXue2min,ZUODa2ming,ZHAONa2liang(DepartmentofImmunology,SouthernMedi2calUniversity,Guangzhou[Abstract] theN2termina
4、lfragmentofhumanmannan2bindinglectin(MBL)associatedserineproteases22(MASP22N)inE.. Thetargetsequencein15pGEM2MASP2plasmidthatcontainshumanMBL2MASP2cDNAwasamplifiedbyPCR,andinsertedintoprokaryoticexpressionvectorpGEX4T21.Therecombinantexpressionvectorwasidentifiedbyrestrictionmappingandse
5、quencing,andthentransformedintoE.coliBL21(DE3)cells.TheexpressedproductwaspurifiedbyGSTrapimmobilizedmetalaffinitychromatography(IMAC)andidentifiedbySDS2PAGEandWesternblotassay.Bindingactivityoftheexpressionproducttothecollagen2likere2gionofhumanMBL(MBL2CLR)wasanalyzedbyanindirectenzyme2
6、linkedimmunosorbentassay(ELISA).Results TheDNAfragmentof840bp,whichencodetheN2terminalregionofhumanMASP2,wasamplifiedfrompGEM2MASP2plasmidandtherecombinantexpressionvec2tor,pGEX4T2MASP22N,wasconstructed,whoserestrictionmapsandsequencewereconsistentwiththoseexpected.ThecomponentofMr60000i
7、nthepurifiedrecombinantproductwasfoundbySDS2PAGEandcouldberecognizedbyanti2GSTantibodyinWesternblotassay.ThepurifiedrecombinantproductcouldreactwithhumanMBL2CLRintheindirectELISA.Conclusion Theprokaryoticcellstrainthatexpresses15efficientlytherecombinanthumanMASP22N(rhMAS
