mfshr基因n端片段的序列分析、原核表达载体构建及其表达

《mfshr基因n端片段的序列分析、原核表达载体构建及其表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、mFSHR基因N端片段的序列分析、原核表达载体构建及其表达作者：黄海雁，文梦灵，张惠玲【摘要】目的：克隆小鼠卵泡刺激素受体(FSHR)基因N端部分片段(2890aa)(mFSHRn);预测其编码蛋白作为候选避孕疫苗的可行性;构建原核表达重组质粒，并在大肠杆菌中表达。方法：提取小鼠睾丸组织总RNA，利用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术反转录成cDNA，按照GeneBank中小鼠FSHRN端序列设计引物，扩增基因片段并插入pET32a载体，测序鉴定后做生物信息学分析;质粒转化E.coliBL21(DE3)感受态菌株诱导表达蛋白。结果：扩增

2、片段长度为186bp,测序结果与预期结果完全一致，生物信息学分析其编码蛋白具有良好的抗原性;重组原核表达质粒经鉴定获得正确重组子并诱导表达。结论:mFSHRn蛋白可作为良好的候选避孕疫苗，成功构建了pET32amFHSRn原核表达重组质粒，获得可表达mFHSRn的大肠杆菌菌株，为后续的相关研究奠定了基础。【关键词】卵泡刺激素受体;原核;表达;生物信息学分析Objective:ToclonefolliclestimulatinghormonereceptorgeneNterminalfragment(2890aa)(mFSHRn),andtofo

3、recastthepossibilityofitsencodingproteinbeingpregnancyvaccine,12andtoconstructprokaryoticexpressionrecombinantplasmidandexpressitincolibacillus.Methods：MousetestisRNAwasextractedandinverselytranscribedtocDNAbymeansofRTPCR.TheprimerwasdesignedaccordingtomouseFSHRNterminalseque

4、nceofGenebank,andthengenefragmentswereamplifiedandpET32avectorwasinserted.Aftersequencing,bioinformaticswasanalyzed.ExpressionproteinwasinducedbyplasmidtransformationE.coliBL21(DE3)competencestrain.Results：Theamplificationlengthwas186bp,sequencingandexpectationwascompletelycon

5、cord.Bioinformaticsanalysisshowedtheencodingproteinhadsatisfactoryantigenicity.Therestructuringprokaryoticexpressionplasmidobtainedreconandinducedexpression.Conclusion：mFSHRnproteincanbeareliablecandidateofpregnancyvaccine.WesuccessfullyconstructpET32amFHSRnprokaryoticexpress

6、ionrecombinantplasmidandgainmFHSRnexpressingcolibacillusstrain,andlayafoundationforfurtherstudy.　　[KEYWORDS]Folliclestimulatinghormonereceptor;Protocaryon;Expression;Bioinformaticsanalysis　　卵泡刺激素(folliclestimulatinghormone12，FSH)是一种糖蛋白激素，通过特定的G蛋白偶联受体在细胞膜表面发挥作用。卵泡刺激素受体(follic

7、lestimulatinghormonereceptor,FSHR)是一种寡聚糖蛋白构成的膜受体,4个单体由二硫键连接，属于G蛋白偶联受体家族。人FSHR由695个氨基酸组成：氨基端17个氨基酸为疏水性信号肽;紧接信号肽的是349个氨基酸组成的亲水性结构区，由亮氨酸-精氨酸-精氨酸序列构成的交替β片层和α螺旋结构组成，构成FSHR的胞外区;接着是264个氨基酸构成的跨膜区，由7个徘徊式穿越细胞膜的疏水段组成;胞内区是65个氨基酸组成的羧基末端。　　多年来，免疫避孕疫苗用于控制男性生育的研究日益增多，以几种生殖激素、激素受体和精子特异蛋白作为靶抗

8、原为主。近年来的相关研究表明选择特异性结合靶点的多肽片段对疫苗的选择和免疫功能很重要，可以提高疫苗的特异性和免疫效果，是有