EB病毒gp85N端片段原核表达及初步鉴定

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1、EB病毒gp85N端片段原核表达及初步鉴定作者：涂向东吴玉水邱龙翔连云宗程烽兰风华朱忠勇毕业论文【关键词】；EB病毒；，gp85,N端片段；，表达；，免疫原性毕业论文ProkaryoticexpressionandcharacterizationofNterminaltruncatedglycoproteingp85ofEpsteinBarrvirus毕业论文[Abstract]AIM：ToconstruetaprokaryoticrecombinantvectorofEpsteinBarrvi

2、rus(EBV)membraneproteingp85,toexpresstheproteininE.coliandcharacterizetheantigenicityofthisnonglycosylatedprotein.METHODS：TheBXLF2genecoding5ZterminaltruncatedofEBVgp85wasamplifiedfromtheEBVstrainB958celllinewithspecificprimers・Afteridentificationbyt

3、herestrictiondigestionwithHindIIIandXhoI,thePCRproductwasinsertedintotheprokaryoticexpressionplasmidpGEX5Tandconfirmedbysequencing.TheconstruetedprokaryoticexpressionvectorpGEX5T85NwastransformedintothecompetentE.coliBL21.Theexpressedrecombinantprote

4、ingp85Nwaspurifiedbyaffinitychromatography,characterizedbyWesternblot,andusedimmunizeBALB/cmice・ThetiterofantisevumfromtheimmunizedmicewasdetectedbyELISA.RESULTS:SequencinganalysisrevealedthattheobtainedtruncatedBXLF2genewasidenticaltothatpublishedin

5、GenBankandsuccessfullyclonedintopGEX5T.SDSPAGEshowedthattheexpressedrecombinantproteinwaspartiallysolublewitharelativemolecularmassof45000.ELISAresultsindicatedthattheexpressedgp85Nwasrecognizedbythattheantigp85mAbandcontiserumwithhightiterwasobtaine

6、dfromtheimmunizedmice.CONCLUSION：；Theobtainedrecombinantgp85Nwithanexcellentantigenicityshouldprovidepreliminarydataforcharacterizationoftheantibodyproducedbytheimmunizedmice・毕业论文[Keywords]EpsteinBarrvirus；Nterminalfragmentofgp85；expression；immunogen

7、icity毕业论文[摘要];目的：构建EB病毒基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。分析非糖基化的EB病毒包膜糖蛋白gp85N端截短片段的抗原性。方法：采用基因工程技术，以B958细胞（美洲绒猴外周血B淋巴细胞经EBV转化后的细胞系）［1］培养上清为模板，用PCR扩增EB病毒的BXLF2基因N端片段。PCR产物经HindIII和XhoI双酶切，插入原核表达载体pGEX5T中，构建pGEX5T85N重组表达质粒，并在大肠杆菌BL21中诱导表达gp85N蛋白。纯化表达的蛋白用Westernbl

8、ot鉴定，并免疫BALB/c小鼠。结果：序列分析表明，插入片段的序列与GenBank登录的参考序列完全一致。重组表达的蛋白的相对分子质量（Mr）约为45000,同预期的大小相符。以纯化的可溶性重组蛋白免疫BALB/c小鼠，经ELISA检测获得了高效价的抗血清，且抗gp85单克隆抗体（mAb）可识别所表达的gp85N抗原。Western；blot显示，该抗原可与小鼠免疫血清起特异性反应。结论：表达并纯化的EB病毒截短的gp85N重组蛋白具有良好的抗原性，;为下一步分析所产生抗体的生物学特性提供了条