沉默调节蛋白1过表达通过抑制结缔组织生长因子改善转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞株的凋亡.pdf

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1、·454·中国药物与临床2015年4月第l5卷第4期ChineseRemedies＆Clinics，April2015，Vo1．15，No．4沉默调节蛋白1过表达通过抑制结缔组织生长因子改善转化生长因子一131诱导人肾小管上皮细胞株的凋亡董莉王晨史永红韦金英杜春阳李宏博吴海江任韫卓【摘要】目的观察沉默调节蛋白1(Sirt1)过表达对转化生长因子(TGF)．B，诱导人肾小管上皮细胞凋亡的影响及其机制研究。方法将体外培养人肾小管上皮细胞分为正常对照组、TGF．B刺激组及TGF．。+Sirtl过表达组。采用

2、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡；流式细胞术及hoechst33258染色法分别检测细胞凋亡百分比；蛋白质印迹法检测Sirtl、结缔组织生长因子(CTGF)、Bax、Bc1．2的表达；实时荧光定量聚合酶链反应(Realtime．PCR)检测Sirtl、CTGF、Bax、Bcl一2mRNA水平；活性比色法检测Sirtl活性；免疫细胞化学方法检测Sirtl表达。结果与正常对照组相比，TGF—B。刺激组肾小管上皮细胞Sirtl表达及活性均显著下降，同时CTGFmRNA及蛋白水平显著上升，细胞

3、凋亡百分比明显增加(P<0．01)，Bax／Bc1．2比率明显升高(19<0．05)。Sirtl过表达能够显著抑制TGF．B．诱导的CTGF水平升高，降低肾小管上皮细胞凋亡百分比，减少Bax／Bc1．2比率(P<0．05)。结论Sirtl过表达能够抑制TGF．B，诱导的人肾小管上皮细胞凋亡，并且该作用的实现可能是部分通过抑制CTGF实现的。【关键词】转化生长因子B；肾小管；上皮细胞；细胞凋亡SirtloverexpressionameHoratesTGF-Bl·inducedhumankidneypr

4、oximaltubularcellapoptosisbyinhibitingCTGFD0WangChen~ShiYonghong,WeiJinying,DuChunyang,LiHongbo，WuH嘶iang,RenYunzhuo．*DepartmentofPatholog％HebeiMedicalUniversity,Sh~iazhuang050017，China【Abstract】0bjectiveToinvestigatetheeffectofSirtloverexpressiononTGF—B

5、rindueedapoptosisinhumankidneyproximaltubularcelllinefHK．21anditsmechanism．MethodsCulturedHK．2cellsweredividedintonormalgroup(NG)，TGF-p1(5ng／m1)group，TGF—pl(5ng／m1)+Sialoverexpressionplasmidgroup．ApoptosisofHK-2cellswasanalyzedbyDcadEndTMFluorometricTUN

6、ELSystem．Meanwhile，apoptoticcellpercentagewasalsoobservedbyflowcytometryofAnnexinV／PIstainingassayandhoechst33258staining．TheexpressionlevelsofSirtl。CTGF。Bax，Bcl一2wereobservedbywesternblot．TheexpressionlevelsofSirt1．CTGFI．Bax．Bc1．2mRNAwereobservedbyreal

7、time．PCR．Sirt1deacetvlaseactivitywaseolorimetricallymeasuredbytheSirtldeacetylaseactivityassaykit．Immuno—cytochemistrywasusedtoinvestigatethelocationandlevelofexpressionofSirtlprotein．ResultsComparedwithNG，theexpressionofCTGFf尸<0．01)，thenumberofcellapop

8、tosis(P<0．o1)andratioofBax／Bel一2(P<0．05)signifi．eantlyincreased．whiletheexpressionandactivityofSirtldecreaseddramaticallyinHK一2cellsintheTGF．B1groupfP