mTORC1通路诱导人肾小管上皮细胞骨桥蛋白的表达.pdf

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1、·1156·中国药理学通报ChinesePharnuwologicalBulletin2014Aug；30(8)：1156—60网络出版时间：2014-7—1016：51网络出版地址：hccp：／／www．cnki．net／kcms／doi／10．3969／j．issn．1001—1978．2014．08．024．html高糖激活PDK／AKT／mTORC1通路诱导人肾小管上皮细胞骨桥蛋白的表达王凤梅，蒋克国，张桂霞，周海胜，查晓军，郝丽，王德光(1．安徽医科大学第二附属医院肾内科，安徽合肥230601；2．安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室，安徽合肥230032；3．皮肤病学国家重点实验

2、室培育基地，安徽合肥230032)doi：10．3969／j．issn．1001—1978．2014．08．024(VEGF)等表达参与这一过程¨J。然而，DN的发生文献标志码：A文章编号：1001—1978(2014)08—1156—05发展机制目前还不是十分清楚，是否有其他重要蛋中国图书分类号：R322．61；R329．24；R341；R394．2；R977．6白和信号转导通路参与其发病进展过程有待于进一摘要：目的探讨高糖刺激上调人肾小管上皮细胞株(HK一步研究。2)骨桥蛋白(OPN)表达的分子机制。方法利用高糖(25骨桥蛋白(osteopontin，OPN)是一种具有多种功mmol·L)

3、刺激HK-2细胞，并应用特异性抑制剂、siRNA能的磷酸化糖蛋白，主要与avB整合素或CIM4家抑制PI3K和(或)mTOR活性，应用Rea1．timePCR检测OPN族结合，参与细胞间黏附、趋化、迁移和信号传导等mRNA表达；Westernblot检测OPN、p-AKT、p-s6、Raptor和生理及病理过程，在肿瘤、动脉粥样硬化等多种疾病Rictor蛋白表达。结果高糖刺激呈时间依赖性上调HK-2细胞OPN表达，其中，OPNmRNA在刺激48h后达高峰；的发生发展中起重要作用。在糖尿病动物模型中发OPN蛋白表达在72h达到最高。此外，高糖刺激激活PI3K／现肾脏OPN表达升高，利用基因敲除O

4、PN基因后，AKT／mTORC1信号通路。利用PI3K特异性抑制剂可减轻系膜细胞膨胀，降低尿蛋白产生，并发现LY294002、mTORC1特异性抑制剂rapamycin抑制PI3K．／OPN通过激活NF-wB途径，增加足细胞能动性，参AKT／mTOR通路后，HK-2细胞的OPN表达明显降低。进一与蛋白尿的形成j。在DN中，肾脏局部表现为炎步，siRNA敲低Raptor降低HK-2细胞中OPN蛋白的表达，性细胞浸润、间质纤维化，伴OPN、TGF一8等表达升而敲低Rictor对OPN蛋白表达无影响。结论高糖通过激高，利用抗体中和OPN表达后，减轻局部的巨噬细活PI3K／AKT／mTORC1通路上调

5、HK-2细胞OPN的表达。胞聚集，延缓纤维化进展J。以上研究表明，OPN参与DN单核巨噬细胞聚集、间质纤维化及蛋白尿关键词：高糖；人肾小管上皮细胞；骨桥蛋白；PI3K／AKT／产生等过程，一定程度上抑制OPN表达后可减轻上mTOR；雷帕霉素；调控机制述病变，但引起OPN表达升高的具体机制仍不清楚。探讨OPN是否能成为逆转DN病理改变新的糖尿病肾病(diabeticnephropathy，DN)是我国靶点及其具体的调控机制，目前已成为研究热点。终末期肾脏病(ESRD)的主要原因之一，且比重逐在本实验中，我们以HK-2细胞为模型，研究高年上升。众多研究表明，长期血糖升高可激活多元糖刺激下OPN的表

6、达，并进一步探讨其调控机制。醇通路、PKC通路、已糖胺途径，促使活性氧类产生1材料与方法过多，以及葡萄糖在非酶促下生产的糖基化终末产1．1主要试剂及药品DMEM低糖培养基(葡萄物(AEGs)在细胞外聚集，导致细胞外基质蓄积、肾糖浓度4．5mmol·L)、DMEM高糖培养基(葡萄小球硬化等病理改变。高糖还可诱导多种细胞因子糖浓度25mmol·L)购于美国Hyclone公司；胎牛如转化生长因子．B1(TGF-131)、血管内皮生长因子血清购自美国Gibco公司；鼠抗p-AKT(ser473)、P—收稿日期：2014—05—11，修回日期：2014—06—13s6，兔抗Raptor和Rictor购自

7、CellSignaling；兔抗基金项目：国家自然科学基金青年科学基金资助项目(NoOPN购自美国Abcam公司；鼠抗B-actin、辣根过氧81101524)；安徽高校省级自然科学研究资助项目(No化酶标记的IgG羊抗鼠和羊抗兔二抗购自美国San．KJ2010A168)taCruz公司。TRIzol试剂盒、DMSO试剂购自上海作者简介：王凤梅(1987一)，女，硕士，研究方向：糖尿病肾病发病机生