HBx基因通过调节凋亡相关蛋白Bax／Bcl-2比值促进人肾小管上皮细胞凋亡-论文.pdf

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1、中国医科大学学报第43卷第1期2014年1月·38·JournalofChinaMedicalUniversityVo1．43No．1Jan．2014·论著·HBx基因通过调节凋亡相关蛋白Bax／Bcl一2比值促进人肾小管上皮细胞凋亡何平，李红，李德天，冯国和(中国医科大学附属盛京医院1．肾内科；2．心内科；3．感染科，沈阳110004)摘要目的探讨HBVx基因(HBx)对人肾小管上皮细胞株(HK．2)增殖和凋亡的影响及机制。方法采用脂质体转染法，将质粒pCDNA3．1(+)HBx转染至HK。2细胞株。细胞实验分5组，对照组、转染空质粒pCDNA3．1(+)组、转染pCDNA3．1

2、(+)HBx24h组、转染pCDNA3．1(+)HBx48h组、转染pCDNA3．1(+)HBx72h组。CCK8方法检测瑚x对各组细胞增殖抑制率的影响；用透射电镜及AV／PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率。应用免疫细胞化学及免疫印迹检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax及Bcl一2水平。结果经酶切鉴定及测序结果显示pCDNA3．1一HBx构建成功。与对照组相比，空质粒组细胞存活率及凋亡率无明显差异，凋亡相关蛋白Bax／Bcl一2比值无明显差异(P>0．05)。转染HBx基因24h后，细胞增殖明显受抑，凋亡率显著增加，Bax／Bcl一2比值开始增高。至72h，细胞增殖抑制率最高达到(35．2

3、7+1．10)％，细胞凋亡率达到最高为(23．80+2．16)％，Bax／Bel一2比值显著增高。与对照组及其他各组比较，具有显著性差异(P<0．05)。结论HBx基因可抑制HK．2细胞增殖并通过提高凋亡相关蛋白Bax／Bcl一2比值诱导其凋亡。关键词HBx基因；HK一2；凋亡；真核表达载体；乙肝病毒相关性肾炎中图分类号R512．6文献标志码A文章编号0258—4646(2014)01—0038—07网络出版地址http：／／www．cnki．net／kcms／detail／21．1227．R．20140123．1703．001．htmlHBxGenePromotesApoptos

4、isinHK-2CellsThroughRegulatingApoptosis--relatedProteinRatioofBax／Bcl·-2HEPing，LIHo，LIDe—fian，FENGGuo-he。(1．DepartmentofNephrology，ShengjingHospital，ChinaMedicalUniversity，Shenyang110004，China；2．DepartmentofCardiology，Shen~ingHospital，ChinaMedi—calUniversity，Shenyang110004，China；3．Departmentof

5、InfectiousDiseases，ShengjingHospital，ChinaMedicalUniversity，She~g110004，China)AbstractObjectiveTodiscusstheinfluenceofHBVXgene(HBx)ontheproliferationandapoptosisofhumanrenaltubularepithelialcellline(HK·2)．MethodsTheexperimentwasdividedintofivegroups：thecontrolgroup，celstransfectedwithemptyplas

6、midPCDNA3．1(+)，PCD—NA3．1(+)HBx24h，PCDNA3．1(+)HBx48handPCDNA3．1(+)HBx72h，respectively．TheCCK8methodwasusedtodetecttheinfluenceofHBxtotheinhibitionratesofcellproliferationineachgroup，andtransmissionelectronmicroscopyandAV／PIdoublestainingflowc~ometrywereusedtodetectapoptosisrates．Withimmunocytoc

7、hemistryandWestemblottestswereusedtomeasurethecellapoptosisrelatedproteinsBaxandBcl一2levels．ResultsRestrictionenzymedigestionandsequencingresul~showthatthePCDNA3．1一HBxwasconstructedsuccessfully．Comparedwiththecontrolgroup，theviabilityan