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《HBx基因通过调节凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值促进人肾小管上皮细胞凋亡-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中国医科大学学报第43卷第1期2014年1月·38·JournalofChinaMedicalUniversityVo1.43No.1Jan.2014·论著·HBx基因通过调节凋亡相关蛋白Bax/Bcl一2比值促进人肾小管上皮细胞凋亡何平,李红,李德天,冯国和(中国医科大学附属盛京医院1.肾内科;2.心内科;3.感染科,沈阳110004)摘要目的探讨HBVx基因(HBx)对人肾小管上皮细胞株(HK.2)增殖和凋亡的影响及机制。方法采用脂质体转染法,将质粒pCDNA3.1(+)HBx转染至HK。2细胞株。细胞实验分5组,对照组、转染空质粒pCDNA3.1(+)组、转染pCDNA3.1
2、(+)HBx24h组、转染pCDNA3.1(+)HBx48h组、转染pCDNA3.1(+)HBx72h组。CCK8方法检测瑚x对各组细胞增殖抑制率的影响;用透射电镜及AV/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率。应用免疫细胞化学及免疫印迹检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax及Bcl一2水平。结果经酶切鉴定及测序结果显示pCDNA3.1一HBx构建成功。与对照组相比,空质粒组细胞存活率及凋亡率无明显差异,凋亡相关蛋白Bax/Bcl一2比值无明显差异(P>0.05)。转染HBx基因24h后,细胞增殖明显受抑,凋亡率显著增加,Bax/Bcl一2比值开始增高。至72h,细胞增殖抑制率最高达到(35.2
3、7+1.10)%,细胞凋亡率达到最高为(23.80+2.16)%,Bax/Bel一2比值显著增高。与对照组及其他各组比较,具有显著性差异(P<0.05)。结论HBx基因可抑制HK.2细胞增殖并通过提高凋亡相关蛋白Bax/Bcl一2比值诱导其凋亡。关键词HBx基因;HK一2;凋亡;真核表达载体;乙肝病毒相关性肾炎中图分类号R512.6文献标志码A文章编号0258—4646(2014)01—0038—07网络出版地址http://www.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20140123.1703.001.htmlHBxGenePromotesApoptos
4、isinHK-2CellsThroughRegulatingApoptosis--relatedProteinRatioofBax/Bcl·-2HEPing,LIHo,LIDe—fian,FENGGuo-he。(1.DepartmentofNephrology,ShengjingHospital,ChinaMedicalUniversity,Shenyang110004,China;2.DepartmentofCardiology,Shen~ingHospital,ChinaMedi—calUniversity,Shenyang110004,China;3.Departmentof
5、InfectiousDiseases,ShengjingHospital,ChinaMedicalUniversity,She~g110004,China)AbstractObjectiveTodiscusstheinfluenceofHBVXgene(HBx)ontheproliferationandapoptosisofhumanrenaltubularepithelialcellline(HK·2).MethodsTheexperimentwasdividedintofivegroups:thecontrolgroup,celstransfectedwithemptyplas
6、midPCDNA3.1(+),PCD—NA3.1(+)HBx24h,PCDNA3.1(+)HBx48handPCDNA3.1(+)HBx72h,respectively.TheCCK8methodwasusedtodetecttheinfluenceofHBxtotheinhibitionratesofcellproliferationineachgroup,andtransmissionelectronmicroscopyandAV/PIdoublestainingflowc~ometrywereusedtodetectapoptosisrates.Withimmunocytoc
7、hemistryandWestemblottestswereusedtomeasurethecellapoptosisrelatedproteinsBaxandBcl一2levels.ResultsRestrictionenzymedigestionandsequencingresul~showthatthePCDNA3.1一HBxwasconstructedsuccessfully.Comparedwiththecontrolgroup,theviabilityan
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