热休克蛋白47在转化生长因子β1刺激的肾小管上皮细胞转分化中的作用.pdf

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1、r213V01．29，No．10·775·基础研究·热休克蛋白47在转化生长因子I31刺激的肾小管上皮细胞转分化中的作用毕慧欣刘瑞洪孙林刘虹袁曙光黄谷香谌南岚【摘要】目的阐明热休克蛋白47(HSP47)在转化生长因子131(TGF一131)刺激的人近端肾小管上皮细胞(HK一2细胞)向间充质细胞转分化(EMT)中的作用及可能机制，探讨以HSP47为靶点抑制TGF-131诱导的HK一2细胞EMT过程。方法Western印迹检测不同浓度TGF一131(0、2．5、5、10g／L)刺激HK一2细胞不同时间(0、12、24、48h)后HSP47的表达；用10g／LTGF一

2、131刺激HK一2细胞，Western印迹及实时定量PCR(rea1．timePCR)检测波形蛋白(vimentin)及紧密连接蛋白(zonaocclndens一1，ZO一1)的表达变化，Western印迹检测不同时间磷酸化(P)一Smad3及Smad3的表达；转染HSP47siRNA及HSP47siRNA阴性对照，对照组为无基因抑制效果的一段siRNA，再予TGF．131刺激，Western印迹检测HSP47、p-Smad3及Smad3的表达，Western印迹及rea1．timePCR检测vimentin及z0—1的表达。结果TGF一131干预HK．2细胞，

3、HSP47蛋白呈浓度和时间依赖性表达上调(均P<0．05)。Western印迹、real—timePCR结果显示1OTGF—B1刺激后，HK．2细胞vimentin蛋白及mRNA表达呈时间依赖性升高(均P<0．05)，ZO一1蛋白及mRNA表达呈时间依赖性降低(均P<0．05)。Western印迹结果显示TGF—B1促进Smad3磷酸化，上调P—Smad3／Smad3表达(P<0．05)，在30min时达到峰值，随后稍下降，在24～48h达到另一峰值。与TGF．B1组相比，转染HSP47siRNA后HSP47蛋白表达明显下调(P<0．05)，同时ZO一1蛋白及m

4、RNA表达上调(均P<0．05)，vimentin蛋白及mRNA表达下调(均P<0．05)；同时p-Smad3／Smad3表达下调(P<0．05)。结论HSP47可促进肾小管上皮细胞EMT，可能与TGF．B1．Smad3信号通路活化有关。【关键词】转化生长因子B1；HSP47热休克蛋白质类；上皮细胞；细胞转分化Efectofheatshockprotein47onepithelial—mesenchymaltransdifferentiationinducedbytransforminggrowthfactor131intherenaltubularepithe

5、lialcellsBIHui—xin．HURui—hong,SUNLin．Hong,YUANShu—guang,HUANGGu-xiang,CHENNan—lan．DepartmentofGeriatrics。SecondXiangyaHospital，CentralSouthUniversity,Changsha410011，ChinaCorrespondingauthor：LIURui—hong,Email：lrh198@yahoo．cn【Abstract】objectiveTodetecttheexpressionofheatshockprotein47(

6、HSP47)inrenalproximalepithelialcelllines(HK一2)andtoinvestigatetheroleofHSP47intheprogressoftransforminggrowthfactor131(TGF—p1)inducedepithelial-mesenchymaltransdiferentiation(EMT)inHK．2cells．MethodsHK一2cellswereexposedtoTGF—B1(0，2．5，5，10Ix#L)fordifferenttime(0，12，24，48h)．Theexpressio

7、nofHSP47wasexaminedhyWesternblotting．ThenHK一2ceilswereexposedto10TGF—p1，theexpressionsofvimentin，zonaoccludens一1(ZO一1)wereexaminedbyWesternblottingandreal。timePCR．Furthermore，theexpressionsofP—Smad3andSmad3wereexaminedbvWesternblotting．HK一2cellsweretransfectedwithHSP47siRNAandsiRNAne

8、gativecontro