保肝药物体内活性筛选方法的建立-论文.pdf

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1、药物研究中国民族民Sal医药ThemedicinestudyChinesejoumalofethnomedicineandethnopharmacy·31·保肝药物体内活性筛选方法的建立吴爱萍段小花周志宏代蓉淤泽溥云南中医学院，云南昆明650500【摘要】目的：建立一种稳定便捷的保肝药物活性筛选方法。方法：用CC1复制小鼠急性肝损伤模型，考察CC1染毒剂量、染毒时间及染毒途径对实验结果的影响，选择阳性对照药物，多次重复实验来考察方法的稳定性。结果：对小鼠一次性腹腔注射0．2％CC1橄榄油溶液0．1ml／lO~bw，染毒20h后，

2、模型组小鼠血清ALT、AST均高于正常组(P<0．01)，可成功复制急性CC14肝损伤模型；联苯双酯组小鼠血清ALT低于模型组(P

3、08—003l一02肝脏被誉为人体的化工厂，在机体代谢中有极其重要毒物的浓度和给药体积，为了使各组的给药体积一致，本的作用。肝脏疾病是人类最常见的疾病之一，严重威胁着实验采用同体积不同浓度的方法，即染毒剂量由浓度决定。人类健康。许多因素，如病毒、生物、药物、理化、酒精故参考文献[9—12]将CC1设置了0．05％、0．1％、及全身性疾病的影响，都可以导致肝损伤。研究证明，无0．2％三个浓度，给药体积均按0．1ml／lOg。染毒时间是指论何种原因引起的肝脏病变，肝细胞损伤都是其共同的病药物进入机体后发挥毒性作用的时间，也是影响毒性

4、的主理基础。肝损伤长期存在，往往是导致肝纤维化，甚要因素，故参考文献[9—12]选择12h、16h和20h三个至肝硬化、肝癌发生的重要始动因素。研究开发具有保肝时间点。染毒途径也是必须考虑的，CC1染毒常用腹腔注活性的药物是防治各类肝脏疾病的重要措施之一，为寻找射和皮下注射两种染毒途径，但皮下注射常有少量药液从和发现更好的保肝药物，需建立适用于保肝药物活性筛选注射部位漏出，影响染毒剂量的准确性，故本实验采用腹的研究方法。我们通过多次重复实验，建立了稳定的小鼠腔注射。四氯化碳急性肝损伤动物模型，成功地应用于保肝药物和参考文献[4—

5、7]方法，取昆明种清洁级小鼠100只，活性成分的追踪筛选研究。雌雄各半，体重18～22g。按体重与性别随机分为10组，1材料即正常对照组和CC1三个染毒剂量不同染毒时间的9个组昆明种小鼠，清洁级，雌雄兼用，体重l8—22g。均购(见表1分组)。每组动物均为l0只。除正常对照组外，其自四川省医学科学院实验动物研究所，合格证号：SCXK余各组分别腹腔注射0．05％、0．1％、0．2％三个不同浓度(川)2008—24。批号：Dossy2010—12。四氯化碳的CC1橄榄油溶液0．1ml／lOg．bw。造模后(禁食不禁水)(CC1)：分

6、析纯，≥99．5％，武汉联碱厂，批号：12h、16h和20h分别摘眼球取血，以5000r／min离心20040310；益肝灵片：国药准字Z19994019，每片含水飞蓟15min，分离血清，按测定试剂盒(赖氏法)操作方法分别宾77mg，四川志远广和制药有限公司，批号：100901；联测定血清血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转苯双酯滴丸：国药准字H33020232，1．5mg×250瓶，5移酶(AST)。次，每133次；浙江医药股份有限公司新昌制药厂，批2．3阳性药物的选择我们首先考虑选择的阳性药物，其号：100409

7、、101004。主要成分最好为从中药或天然药物得到的活性成分，以利2方法于跟受试样品作比较。通过查阅文献，益肝灵主要成分2．1染毒物质的确定保肝药物活性筛选的目的是通过规是水飞蓟宾，而水飞蓟宾为天然药物水飞蓟提取分离得到范化的实验研究方法，确定受试物是否具有保肝降酶作用的活性成分。故选择益肝灵作为阳性药物进行预试验。及其保肝活性成分所在部位，为进一步研究和开发保肝新2．3．1以益肝灵作为阳性药物参考文献[9]，取昆明种药提供实验依据。清洁级小鼠36只，雌雄各半，体重18—22g。按体重与性为了明确受试物中保肝活性成分的存在部位，

8、需建立别随机分为3组，即正常对照组、肝损伤模型组、益肝灵一种稳定、可靠、重现性好的筛选方法，复制适当的肝损组，每组动物12只。益肝灵组灌胃给予相应药物，其余两伤动物模型，选择简单易行的检测指标。经查阅文献组给予等体积1％CMC—Na，灌胃给药体积均为0．1ml／