快速筛选调节肝脂酶活性中药成分方法的研究论文

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1、快速筛选调节肝脂酶活性中药成分方法的研究论文贝伟剑，郭姣，胡因铭，黄利华，胡旭光，曹扬【摘要】目的研究快速筛选调节肝脂酶活性中药成分的方法。方法利用大鼠肝组织匀浆和比色法检测肝脂酶(HL)活性，观察不同实验条件及中药成分对HL活性的影响。结果正常大鼠肝组织匀浆具有明显的HL酶促动力学特性，其HL脂解活性有明显Ca2+依赖性.freelChinesemedicineregulatinghepaticlipaseactivities.MethodsRatliverhomogenateandcolorimetricass

2、ayofhepaticlipase(HL)activitiesedicineonhepaticlipaseactivities.ResultItogenateofSDratsdemonstratedsignificantenzymekiicpropertiesofHL.Itslipolyticactivitiesodulinantagonistpromethazinehydrochloride,consistentatickiicpropertiesofpurifiedHLreportedintheliteratu

3、re.OleanolicacidandginsenosidesRb2ethodforrapidscreeningoftheactiveingredientofChinesemedicineregulatingHLactivitiesbyusingratliverhomogenateinbinationetricassayofHLactivitiespleandreliable,andcouldbeusedin.rapidscreeningoflipidloedicinehavingeffectsonHLactiv

4、ities,andscreeningofactiveingredientsthatmightincreaseHLactivitiesfromeffectiverecipesoftraditionalChinesemedicine.Keyogenate;FufangZhenzhuTiaozhiFang(FTZ)recipe;hepaticlipasactivator肝脂酶(hepaticlipase,HL)是重要的脂代谢酶，其合成、分布、活性的变化和高脂血症、脂肪肝、动脉粥样硬化等密切相关。肝组织和血浆中HL酶活性的

5、降低，可引起高脂血症1-3，并在脂肪肝发病中起重要作用4，5。复方贞术调脂方(简称FTZ)由女贞子、丹参、三七、黄连等中药组成，含有齐墩果酸、三七皂苷、黄连素、丹参素等活性成分，在临床应用和实验研究中发现该方不仅具有明显的降低总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)及升高高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)的作用,并能升高血浆HL活性、抑制动脉粥样硬化(AS)形成、抑制脂肪肝形成等作用6，7，还能使饮食性高脂血症模型大鼠降低的肝组织和血浆中HL的活性恢复至正常水平7。为了研究中药降血脂的物质

6、基础和筛选新药，本研究以HL为靶点，以FTZ组分为调节HL活性成分的筛选对象，研究建立一种采用大鼠肝匀浆比色法测定肝脂酶活性，快速筛选调节HL活性中药有效成分的方法，现报道如下。1材料与仪器1.1材料与试剂FTZ提取物称取FTZ处方药材(由女贞子、丹参、三七、黄连等按2∶1∶0.5∶0.5质量比组成)，置圆底烧瓶中，加70%(φ)乙醇8倍量，浸泡0.5h，加热回流提取1.5h，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，浓缩液备用;药渣加水8倍量，加热回流提取1.5h，滤过，浓缩，合并浓缩至3g生药/g浸膏,临用时用0.1mmo

7、l/LTrisCl缓冲液溶解稀释至相应浓度。三七总皂苷、人参皂苷Rb2、齐墩果酸、盐酸小檗碱、丹参素由中国药品生物制品检定所提供;总脂酶试剂盒(南京建成生物工程研究所);大鼠肝脂酶的ELISA测定试剂盒(武汉中美科技);磷酸盐等试剂均为国产分析纯试剂;盐酸氯丙嗪(Sigma公司);十二烷基硫酸钠(SDS)、二硫代苏糖醇(DTT)(Amresco)。1.2实验动物SpagueDaol/LTrisHCl(pH=9.5)在冰水浴中制成10%(1g/10mL)的匀浆,组织匀浆至显微镜下无完好细胞，低温下8000r/mi

8、n离心5min，取脂层下清液，加入DTT至1mmol/L，保存于-70℃冰箱中备用。Bradford法测定肝匀浆中蛋白质含量,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定匀浆中HL酶蛋白含量。2.2肝组织匀浆中HL活力的比色测定方法HL活性测定是以脂肪乳剂为底物,.freelin，肝匀浆中的HL可将底物中的TG水解为甘油和游离脂肪酸(freefattyacid,F