一种新型抗HIV-1药物筛选方法的建立-论文.pdf

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1、·328·中华临床感染病杂志2014年8月第7卷第4—~]Chin—JClinInfectD—is—,Ausust2014,Vo1．7,No．4·论著·一种新型抗HIV一1药物筛选方法的建立冯婷婷胡华秦爱兰孙蔚吴南屏甘建和【摘要】目的用细胞共培养和流式细胞仪检测建立新型抗HIV一1药物筛选方法，并判断这种方法在筛选抗HIV一1药物中的应用前景。方法把JLTRG细胞和H9／HTLV一ⅢB细胞按照不同比例共培养24，48，72和96h。在荧光显微镜下观察细胞绿色荧光强度和密度，同时用流式细胞仪测定绿色荧光的表达，并确定培养体系中最佳细胞比例和培养时间。通

2、过选出的最佳条件结合药物半衰期检测恩夫韦肽(T20)和依非韦伦(EFV)的有效性及药物半数抑制量(IC50)。采用HIV一1P24抗原荧光定量PCR法检测病毒载量，并采用Spearman秩相关性分析法判断其与药物浓度及平均荧光强度之问的相关性。结果实验结果显示，JLTRG细胞与H9／HTLV—mB细胞按照10：1的细胞数量比例共培养72h为最佳培养比例和时间。以T20和EFV对共培养体系进行验证，结果显示随着T20和EFV浓度的改变，共培养体系中JLTRG细胞感染HIV一1的程度不同，其IC50分别为10nmoUL和5nmo~L。T20和EFV药物浓

3、度与平均荧光强度以及病毒载量呈负相关(r=一1，一0．986和一1，一l，P<0．o1)；平均荧光强度与病毒载量呈正相关(r=0．986和l，P<0．01)。结论本研究建立的新型抗HIV一1药物筛选方法具有耗时短、操作方便等优点，可为抗HIV一1药物的筛选提供新的选择。【关键词】抗HIV药；药物筛选试验；流式细胞术；逆转录聚合酶链反应；半数抑制浓度Establishmentofanewscreeningmethodforanti-HIV-1drugsFengTingting，HuHua，QinAilan，SunWei，WuNanping，CanJia

4、nhe．DepartmentofInfectiousDiseases，theFirstAffiliatedHospitalofSoochowUniversity，Suzhou215006，ChinaCorrespondingauthor：WuNanping，Email：flwnp2013@163．coin；CanJianhe，Email：gaanhe@gmail．corn【Abstract】ObjectiveToestablishandassessanewscreeningmethodforanti—HIV一1drugs．MethodsJIJTRGc

5、ellswereco—culturedwithdifferentproportionsofH9／HTLV—mBcellsfor24，48，72and96h．Intensityanddensityofgreenfluorescentproteinwereobservedunderfluorescencemicroscope，andweretestedusingfloweytometry．Theoptimalproportionofcellsinco—culturesystemandtheculturetimeweredetermined．Theeffe

6、ctivenessofEnfuvirtide(T20)andEfavirenz(EFV)，andtheirhalfmaximalinhibitoryconcentrations(IC50)weredeterminedbyusingcellco—culturesystemandhalflifeofdrugs．HIVloadwasdetectedusingRT—PCRforHIV一1p24antigen．anditscon'elationswithdrugconcentrationandmeanfluorescentintensitywereanalyz

7、edbySpearmanrankcorrelationanalysis．ResultsExperimentsdemonstratedthatJLTRGcellsco—culturedwithH9／HTLV—mBcellsattheproportionof10：1for72hourswasthebest．AlongwiththeconcentrationsofT20andEFVchanged．JLTRGcellswereinfeetedwithHIV一1indifferentdegrees，andtheIC50sofT20andEFVwere10nmo

8、1／Land5nmol／L，respectively．TheconcentrationsofT20andEF