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1、780第四军医大学学报(JFOurthMilMedUniv>Z005;Z6(9>http://jOurnal.fmmu.edu.cn-研究原著-文章编号!1000-Z790(Z005>09-0780-04一种筛选中和活性抗人TNF单抗细胞模型的建立及其应用朱参胜1!Z!刘雪松1!金伯泉1(1第四军医大学基础部免疫学教研室,陕西西安710033,Z陕西省地方病防治研究所实验室,陕西西安710003>三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三Establishmentandapplicat
2、ionofacellinOurstudycanbeemPlOyedinscreenin9neutraliZin9mOnO-clOnalantibOdiesa9ainsthumanTNF.ByemPlOyin9thismOdel,modelforscreeningneutralizingmono-WehaveidentifiedthatDZisOfhi9hneutraliZin9activity,WhichclonalantibodyagainsthumanTNFcanbeusedasarea9entfOrthecOnstructiOnOfthe
3、raPeuticchi-1,Z,LIUxue-song1,JINBo-GuOn1mericantibOdy.Z~UCOn-sheng1DepartmentOfImmunOlOgy,SchOOlOfBasicMedicine,eywords1TNF;mOnOclOnalantibOdy;neutraliZin9activity;FOurthMilitaryMedicalUniversity,Xian710033,China,cellmOdelZDepartmentOfLabOratOry,ShaanXiPrOvincialInstitutefOr
4、#摘要$目的!建立一种筛选中和活性抗人肿瘤坏死因子EndemicDiseaseCOntrOl,Xian710003,China(tumOrnecrOsisfactOr,TNF>mAb细胞模型,并从一组抗人Abstract1AIM:TOestablishandaPPlyacellmOdeltOscreenTNFmAb中筛选出具有相对较高中和活性的mAb.方法!用含100mL/LFCS的DMEM细胞培养液将L9Z9细胞的浓度neutraliZin9mOnOclOnalantibOdya9ainsthumanTNF.METH-调整到1>108/L,按
5、每孔100,加入至96孔细胞培养板ODS:L9Z9cellsWereseededintOflatbOttOmOf96-WellmicrO-卜LtiterPlatesatadensityOf1>108/Lin100!LDMEMcOntainin9中,培养过夜.弃细胞培养上清后,将Z00卜L的实验液转入培养板中,继续培养16h.活细胞用结晶紫染色,脱色后,于100mL/LFCsandculturedat37CfOr16h.sPentmedium570nm波长测定A值.结果!浓度在0.3～0.5mg/L范围内WasremOvedandZ00!LOfe
6、xPerimentalsOlutiOnsWasadded的放线菌素D(antinOmycinD,ActD>对L9Z9细胞的生长抑tOeachWell.ThePlatesWeresimilarlyreincubatedfOr16h,制作用比较稳定;TNF的浓度高于Z0kU/L时,能够使95%fOllOWedbyremOvalOfculturesuPernatantsandstainedWith以上的实验细胞发生凋亡;浓度在1Z.5～50.0卜g/L范围的crystalviOlet.TheabsOrbanceat570nmWasdetermined
7、.RE-mAb对TNF的中和作用具有明显的剂量依赖关系;在SULTS:lntheran9efrOm0.3m9/LtO0.5m9/L,antinOmycinActD,TNF和mAb的浓度分别为0.35mg/L,Z0kU/L和D(ActD>hadstableinhibitOryeffectsOnL9Z9cell9rOWth.lnZ5.0卜g/L的条件下,发现DZ的中和活性与阳性对照抗体无显著性差异(P＞0.05>,但高于阴性对照抗体,E6,D1Z,E11thecOncentratiOnOverZ0kU/L,TNFcOuldinduceOver95%
8、Of(P＜0.01>.与阴性对照抗体比较,E6,E11也具有一定的中exPerimentalcellsaPOPtOsis.lntheran9efrOm
