ppars激动剂体外筛选模型的建立及其在泽泻活性成分筛选中的应用

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1、PPARs激动剂体外筛选模型的建立及其在泽泻活性成分筛选中的应用［摘要］利用酵母GAL4BD-UAS反式激活分析(transactivationassay)系统在哺乳动物细胞屮建立以过氧化物酶体增殖物受体的配体结合结构域(PPARs-LBD,包括PPARa,PPARP和PPARy)为靶点的体外筛选模型，并应用该模型对泽泻化学成分进行筛选，研宂泽泻14种化学成分对PPARs的激活作用。首先构建GAL4BD-PPARsLBD融合表达质粒pBind-PPARs-LBD,采用Lipofectamine将表达质粒pBind_PPARs_LBD与含有UAS：luciferase报告

2、质粒pGL4.35共转染293T细胞。以PPARs的激动剂(PPARa:非诺贝特；PPAR3:L165041；PPARy:罗格列酮)为阳性对照，通过测定萤火虫荧光素酶活性来验证系统是否构建成功，并用该系统来考察泽泻中14种化学成分对PPARs靶点激活的影响。PPARs的阳性激动剂结果显示系统构建成功，用该系统分析泽泻化学成分结果显示泽泻单体化合物5,6，7,8，13,14对PPARa有激活作用，化合物5，7对PPAR3有激活作用，而化合物6,7,8，12对PPARy有激活作用，其中化合物12对PPARY有显著激活能力。该研究在哺乳动物293T细胞中成功构建以PPARa/

3、3/y配体结合结构域为靶点的体外筛选细胞模型，并成功应用于泽泻PPARa/3/y的天然激动剂的筛选。［关键词］过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)；激动剂；泽泻;三萜成分[Abstract]Peroxisomeproliferatorsactivatedreceptors(PPARs)arecloselyrelatedtohumanchronicdisease，suchasdiabetesmellitusandtheothermetabolicdiseases.Inthisstudy,acell-basedPPARs(PPARa/3/y)modelwasdevelo

4、pedforthescreeningofPPARsagonistsfromAlismatisRhizoma(AR).Firstly,293TcellsweretransfectedwiththereconstructedplasmidpBind-PPAR(a，P，ory)-LBDandreportergenepGL4.35，andtheknownPPARsagonistswereusedasthepositivecontrol(fenofibrateforPPARa,L165041forPPAR3,androsiglitazoneforPPARy).Theability

5、ofactivationforPPARswasevaluatedbyanalyzingtheexpressionvalueoflucifcrase.Afterward,the14puretriterpenoidsisolatefromARwereanalyzedonthedevelopedPPARa,PPARPandPPARyscreeningassaymethod.Theresultsshowedthatthecompounds5，6，7，8，13and14fromARhavetheabilityofactivationforPPARa.Thecompounds5an

6、d7fromARhavetheabilityofactivationforPPARP.Thecompounds6，7，8and12fromRAhavetheabilityofactivationforPPARy.Inthisstudy,thecompound12fromARwerefoundtodisplaysignificantactivationonPPARyforthefirsttime.ARtriterpenoidsextractshadtheabilityofactivationforPPARa,PPAR3andPPARy.Theresultssuggeste

7、dthattriterpenoidsextractsfromARwerePPARa，PPAR3andPPARyagonists.TheresultswillhelptoprovidereferenceforclinicalapplicationofAR，andestablishamodelforPPARson293Tcell,whichcanbeusedtoscreenandevaluatePPARsnaturalagonists.［Keywords］peroxisomeproliferator-activatedreceptors；ag