siRNA沉默多药耐药相关蛋白3基因对肝癌细胞耐药性的影响-论文.pdf

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1、中华肝脏外科手术学电子杂志2014年6月第3卷第3期ChinJHepatSurg(ElectronicEdition)，June2014，v01．3，No．3·39基础研究·siRNA沉默多药耐药相关蛋白3基因对肝癌细胞耐药性的影响苏正刘波刘建平张华耀吕泽坚程子亮【摘要】目的研究小干扰核糖核酸(siRNA)沉默多药耐药相关蛋白(MRP)3基因(MRP3一siRNA)对原发性肝癌(肝癌)细胞耐药性的影响。方法应用不同梯度浓度的多柔比星(ADM)制备肝癌耐药细胞株HepG2／ADM，用携带MRP3．siRNA的lipofectamine2000

2、脂质体转染HepG2／ADM细胞。分为HepG2细胞组(对照组)、HepG2／ADM细胞组(耐药组)和转染MRP3一siRNA的HepG2／ADM细胞组(干扰组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测3组细胞MRP3基因信使核糖核酸(mRNA)含量，用蛋白质印迹法检测MRP3蛋白表达，噻唑蓝法检测肝癌细胞对ADM、氟尿嘧啶(5-FU)、长春新碱、奥沙利铂的半数抑制浓度(IC)，并计算耐药指数(RI)。3组实验数据比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD—t或t检验。结果耐药组的MRP3mRNA平均含量(5．16m0-31)较对照组(3．08士

3、0．27)和干扰组(2．85-4-0．23)明显升高(LSD—t=8．765，10．363；尸<0．05)。耐药组的MRP3蛋白含量(21063~274)较对照组(14476~217)和干扰组(6660~153)明显升高(LSD—t=-21．836，79．578；0．05o耐药组对ADM、5-FU、长春新碱、奥沙利铂的R1分别为14．40~0．31、26．68~0．22、28．70~0．49、20．23~0．54，干扰组相应为3．55~0．16、9．60~0．27、2．11-4-0．17、3．15~0．13，干扰组的RI明显低于耐药组(t=

4、53．873，84．933，88．811，53．258；P<0．05o结论siRNA沉默肝癌细胞MRP3基因可提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性，逆转肝癌细胞对化疗药物的耐药性。【关键词】肝肿瘤，实验性；RNA干扰；多药耐药相关蛋白质类Impactofmultldrugresistance-relatedprotein3genesilencedbysiRNAonthedrugresistanceoflivercancercellsSuZheng*,LiuBo，LiuJianping,ZhangHuayao，LyuZejian，ChengZili

5、ang．"DepartmentofHepatobiliarySurgery,SunYat-senMemorialHospitalofSunYat-senUniversity,Guangzhou510120，ChinaCorrespondingauthorLiuJianping,Email：liuzhunlong@126．com【Abstract】ObjectiveToobservetheimpactofmultidrugresistance—relatedprotein(MRP)3genesilencedbysmallinterfering

6、RNA(siRNA)(MRP3一siRNA)onthedrugresistanceofprimarylivercancercells．MethodsThedrugresistancecelllinesHepG2／Adriamycin(ADM)weredevelopedbyexposingparentalcellstostepwiseincreasingconcentrationsofADMandthenMRP3一siRNAsweretransfectedinHepG2／ADMcellswithlipofectamine2000liposom

7、es．Threegroupswereassigned：HepG2cellgroup(controlgroup)，HepG2／ADMcellgroup(resistancegroup)andMRP3一siRNAtransfectedHepG2／ADMcellgroup(interferencegroup)．TheMRP3mRNAcontentsof3groupsweremeasuredbyreal—timefluorescentquantitativepolymeraseDOI：10．3877／cma．j．issn．2095—3232．201

8、4．03．O11基金项目：广东省科技计划项目(2011B031800296)作者单位：510120广州，中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科(苏正、刘建平、张华耀)，胃肠外科(吕泽坚)