多药耐药相关蛋白3表达与肝癌耐药的相关性

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1、多药耐药相关蛋白3表达与肝癌耐药的相关性作者：郭晓林姜雅秋金清龙【摘要】　　目的探讨多药耐药相关蛋白3（MRP3）的表达与肝癌耐药的相关性。方法应用RTPCR方法检测正常肝细胞L02、肝癌细胞BEL及肝癌耐药细胞HepG2/ADM中MRP3mRNA的差异表达，再将MRP3反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染进肝癌耐药细胞HepG2/ADM中，用MTT法、流式细胞仪及RTPCR检测转染后细胞内阿霉素（ADM）的荧光强度、耐药指数及MRP3mRNA的表达情况。结果肝癌耐药细胞HepG2/ADM

2、中MRP3mRNA的表达明显高于正常肝细胞L02和肝癌细胞BEL（P<0.05）。MRP3反义转染进耐药细胞后，可明显降低细胞内ADM的耐药指数，提高细胞内ADM浓度（P<0.05），细胞内MRP3mRNA的表达较未转染细胞下降了62.5%（P<0.05）。结论MRP3的高表达可能是导致肝癌多药耐药的机制之一。【关键词】肝癌；多药耐药；多药耐药相关蛋白3【Abstract】ObjectiveToexploretherelationshipbetultidrugresistanc

3、erelativeprotEin3(MRP3)andlivercancermultidrugresistance.MethodsTheexpressionofMRP3innormalhepatocyteL02,hepatocarcinomacellBELandhepatocarcinomamultidrugresistancecelllineHepG2/ADMeintoHepG2/ADM,intracellulardoxorubicin(ADM)fluorescenceintensity,res

4、istanceindex,andtheexpressionofMRP3mRNAetry,andRTPCR.ResultsTheexpressionofMRP3inHepG2/ADMalhepatocyteL02andhepatocarcinomacellBEL.AftertransfectedRNAaybeoneofthemechanismsofhepatocarcinomamultidrugresistance.【Keya;Multidrugresistance;Multidrugresist

5、ancerelativeprotEIn3　　肿瘤细胞多药耐药产生的分子机制非常复杂，在所有耐药机制中，被认为是最主要的也是人们研究最多就是ABC结合核膜转运蛋白，如P糖蛋白（Pgp）、多药耐药相关蛋白1(MRP1)及乳腺癌耐药蛋白；而最近又发现几个多药耐药相关蛋白的新成员多药耐药相关蛋白2(MRP2)、MRP3、MRP5〔1～4〕，为探讨MRP3与肝癌耐药的相关性，我们从分子水平研究MRP3在肝癌耐药细胞株HepG2/ADM与肝癌细胞株和正常肝细胞株中的差异表达情况，为肝癌的多药耐药提供

6、实验依据。　　1材料与方法　　1.1细胞株及来源　　人肝脏细胞系L02和肝癌细胞系BEL购自中国科学院上海细胞生物学研究所。人肝癌耐药细胞HepG2/ADM购于广州市达晖生物技术有限公司。　　1.2主要试剂、材料与仪器　　阿霉素标准品、MTT均购自Sigma公司，RNA提取试剂盒、Trizol试剂及逆转录酶MMLV均为为Invitrogen产品；DNA聚合酶为大连宝生物工程有限公司产品；显色试剂盒ECLicroplateReader450酶标仪；GeneAmpPCRSystem2400型PCR扩增仪；EP

7、ICS型流式细胞仪；AlphaEaseFC凝胶成像系统。　　1.3RTPCR法检测MRP3mRNA的表达　　采用Trizol一步法提取细胞总RNA，MMLV逆转录酶进行逆转录及PCR扩增，合成cDNA。以βactin作为内参照。PCR引物序列为MRP3(107bp)：上游5′CTTAAGACTTCCCCTCAACATGC3′,下游5′GGTCAAGTTCCTCTTGGCTCA3′；βactin(214bp)：上游5′GTGGGGCGCCCCAGACACCA3′,下游5′CTCCCTTAATGT

8、CACGCACGATTTC3′；扩增条件为：94℃预变性5min，94℃30s，55℃30s，72℃1min，25个循环，72℃延伸7min。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳分离，在多向分析凝胶成像系统中观察。　　1.4MRP3寡核苷酸的转染　　参照脂质体说明书进行转染。HepG2/ADM细胞消化后计数，分别接种于6孔细胞贴壁，更换无血清培养基。实验分反义组、正义组、空脂质体组及对照组。每组设3