蛋白激酶CPKC与肾细胞癌多药耐药相关性的研究

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1、中国医科大学硕士学位论文蛋白激酶C（PKC）与肾细胞癌多药耐药相关性的研究姓名：尚东浩申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：孔垂泽20030301中文摘要目的．肾细胞癌是泌尿系肿瘤中对化学治疗效果较差的肿瘤之一，其主要原因是对化疗药物存在内在的耐受性，即肾癌存在多药耐药(Mu2tidrugresistance，MDR)。／‘肿瘤细胞的多药耐药机制与多种因素有关，目前研究比较清楚的主要为多药耐药基因l(mdrl)的产物P一糖蛋白(P—gP)和多药耐药相关蛋白(MRP)。现有的研究表明蛋白激酶C(PKC)可能参与肿瘤发生、发展、转移和多药耐药

2、等过程的信号传递，PKC是一种钙离子激活，磷脂依赖性的蛋白激酶，是细胞内信号传递中的关键分子之一。)在多种肿瘤细胞组织中已发现PKC活性的增加，但与肾细胞癌和其多药耐药的研究未见报道。因此探讨PKC在肾细胞癌中的表达以及与肾癌多药耐药的关系对揭示肾癌的发生、发展和寻求新的逆转肾癌多药耐药的治疗方法具有十分重要的理论与实际意义。实验方法组织标本：收集中国医科大学第一临床学院泌尿外科2001年8月至12月手术切除并经病理证实为肾细胞癌的新鲜癌组织及癌旁组织各30例，其中男性20例，女性lO例，年龄32-73岁，平均年龄52．8岁。实验方法：1．

3、采用Takai法测定肾癌及癌旁组织蛋白激酶C(PKC)活性。2．RT—PCR法测定P—gP、MRPmRNA的表达。实验结果(1)与癌旁组织相比较，肾癌组织胞浆、胞膜PKC活性明显升高，差异有显著性；在肾癌组织中随分期、分级的增高而显著性增高。膜质比研究表明，肾癌组织中PKC膜质比高于癌旁组织，说明PKC在肾细胞癌癌变的过程中发生了膜转位。(2)P—gpmRNA在肾癌组织的表达率为90％，而在30例癌旁组织中100％表达。并且在肾癌组织中的表达低于癌旁组织，差异有显著性。不同临床分期之间肾癌组织中表达无显著性差异，虽然在病理分级之间G。级的表

4、达高于G。G，，但差异并无显著性；MRPmRNA在所有肾癌组织及癌旁组织都100％表达，肾癌组织高于癌旁组织，差异有意义。并且在肾癌组织中，随病理分级的增高而增高，而在不同临床分期之间差异无显著性。(3)PKC活性与肾细胞癌MDR的相关分析表明，P—gp转录水平与PKC活性无相关性；丽MRP的转录水平与PKC活性呈正相关，胞浆、胞膜的相关系数r分别为0．36、0．45，膜质比与MRP的相关系数为0．62，以上相关系数检验均有意义。讨论目前研究表明肿瘤的多药耐药机制并不是由单一因素决定的，而是由许多因素共同影响的，其中最主要的就是P—gp和M

5、RP。蛋白激酶C是细胞内信号传递中的关键分子之一，现研究发现多种肿瘤组织中的PKC活性增高，在有MDR性质的肿瘤组织中PKC活性水平都显著升高。本研究应用Takai法和RT—PCR法分别测定了肾癌组织及癌旁组织中PKC活性及P—gP、MRPmRNA的表达。发现肾癌组织PKC活性显著增高，并且随分期、分级增高而增高，差异均有显著性。在所有的癌旁组织中都有P—gP的表达，表达水平高于肾·2·癌组织。P—gpmRNA的表达在不同临床分期、病理分级之间元显著差别。MRP在所有被检肾癌组织及癌旁组织都有表达，肾癌组织高于癌旁组织，差异有意义。MRP在

6、临床分期之间也无差异，但在不同病理分级中差别有显著性，提示分期只代表肿瘤的浸润程度，与耐药性的产生无关。从二者在肾癌组织中的表达情况可以看出P—gP、MRP在肾癌组织中都有广泛的表达，对肾癌的多药耐药发挥着重要的作用。MRPmRNA与PKC活性的相关分析证实MRP的表达与PKC活性呈显著正相关，而P—gpmRNA的表达与PKC活性没有相关性，提示PKC的高表达可能介导了MRP转录水平的提高，从而参与了肾细胞癌多药耐药的产生，而P—gP可能没有通过PKC机制的途径诱导肾细胞癌的多药耐药性。本研究还发现由于在癌变的过程中PKC发生了膜转移，膜转

7、移过程促使了肾组织的癌变和肾癌组织的多药耐药，因此应用膜质比研究PKC活性与MRP的表达以及肾癌多药耐药性更有意义。，。一⋯7结论1．肾癌组织胞浆、胞膜PKC活性高于癌旁组织，随分期、分级的增高而显著性增高。PKC膜质比高于癌旁组织，癌变的过程中发生了膜转位。2．P—gpmRNA在肾癌组织中的表达低于癌旁组织，差异有显著性。不同临床分期和病理分级之间差异并无显著性。3．MRPmRNA在肾癌组织高于癌旁组织，随病理分级的增高而增高，而在不同临床分期之间差异无显著性。4．P—gp转录水平与PKC活性无相关性；而MRP的转录水平与PKC活性呈正相

8、关。关键词：肾肿瘤；PKC；多药耐药j’·3·StudyofPKCenzymaticactivityinMultidrugresistanceofhumanrenalcellca