p38介导β-羟丁酸对原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响-论文.pdf

《p38介导β-羟丁酸对原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、中国兽医学报2013年12月第33卷第12期Chin‘，VetSciDec．2013Vo1．33N。．121889p38介导一羟丁酸对原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响宋玉祥，李玉，李心慰，史晓霞，丁红研，韩盈盈，李娜，张仁和，张玉明，王婷婷，殷立恒，郭立辉，李小兵，王哲，刘国文(吉林大学动物医学学院，吉林长春130O62)摘要：本试验旨在探讨B一羟丁酸(BHBA)对体外原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响以及p38MAPK在其中的调控作用。选择培养72h的肝细胞，添加不同浓度的BHBA(0、0．6、1．2、2．4mmol／I)，培养9h，每个浓

2、度3个重复。另外选取细胞，p38MAPK抑制剂SB2O3580(10fmol／L)预处理1h后，添加BHBA，使其终浓度为2．4mmol／L；PI／An—nexinV—FITC双染，运用荧光显微镜观察肝细胞凋亡情况；ELISA法检测p38的活性；实时荧光定量PCR方法检测p38、Caspase一3、Caspase9、bcl2基因的mRNA表达水平。结果表明，与对照组相比，1．2和2．4mmol／IBHBA组的肝细胞凋亡明显增加；p38酶活性明显升高；p38、caspase一3和caspase一9基因mRNA表达水平均显著增加(P<0

3、．01)，bcl2基因mRNA表达水平显著降低(P

4、fprimaryculturedbovinehepatocytesmediatedbyp38SONGYu—xiang，LIYu，LIXinwei，SHIXiao—xia，DINGHong—yan，HANYing—ying，LINa，ZHANGRen—he，ZHANGYu—ming，WANGTingting，YINLiheng，GUOLihui，LIXiao—bind，WANGZhe，LIUGuo—wen(CollegeofVeterinaryMedicine，JilinUniversity。Changchun130062。China

5、)Abstract：Theobjectl。veofthisstudywastoinvestigatetheeffectof7-hydroxybutyrate(BHBA)ontheapoptosisofprimaryculturedbovinehepatocytesandtheimportantroleofp38intheBHBA～inducedapoptosis．Afterhepatocyteswereculturedfor72h，differentconcentrationsofBHBA(0，0．6，1．2，2．4mmol／L)w

6、ereaddedwiththreereplicationsinonegroupandculturedforanother9h．Hepatocyteswerepretreatedwithp38inhibitorSB203580(10／~mol／L)for1h，thenBHBAwereaddedinthefinalconcentrationof2．4mmol／L．ApoptosisofhepatocyteswasobservedbvfluorescencemicroscopyafterstainedwithPI／AnnexinV—FIT

7、C．Theenzymeactivityofp38wasdetectedbyavailablep38activitykitsatthesametime．ThemRNAexpressionlevelsofD38andapoptoticrelatedgenesincludingcaspase一3，caspase一9andbcl一2weredetectedbyusingrea1一timefluorescencequantitativeRT—PCR(qRT—PCR)．Theresultsshowedthattheapoptoticce11si

8、nhighconcentrationsofBHBA(1．2，2．4mmol／L)weresignificantlyincreasedcomparedwiththecon～trolgroup．P38enzymeactivitywasgr