γ-氨基丁酸对肿瘤细胞增殖凋亡的影响

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1、徐州医学院硕士学位论文γ--氨基丁酸对肿瘤细胞增殖凋亡的影响姓名：游云红申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：裴冬生2012-04徐州医学院硕士学位论文Y．氨基丁酸对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响中文摘要目的体外检测GABA对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响并探索其在肿瘤细胞中作用的分子机制。方法用W-eStemBlot和免疫细胞化学检测肿瘤细胞宫颈癌Hela，肾癌786．O，乳腺癌Bc印．37及胃癌SGC．7901细胞中GABAB受体的表达；用CCK一8法检测Q姬A对肿瘤细胞Hela，786．O，Bcap．37和SGC一7901细胞增殖的影响；用FITC．舭xinv-PI染色

2、检测GABA对以上4种肿瘤细胞凋亡的影响；用W

3、eStemBlot检测GABA对肿瘤细胞的作用是否存在烈K的激活；采用免疫共沉淀和免疫印迹观察GABA是否引起GABABR·p．a玎estin·ⅢK信号模块的组装。结果Wbst锄Blot和免疫细胞化学检测证明宫颈癌Hela，肾癌786一O，乳腺癌Bcap．37及胃癌SGC．790l细胞中均存在GABAB受体的表达；CCK．8结果显示：与对照组相比，GABA可以抑制肿瘤细胞Hela，786一O，Bc印．37及SGC．790l的增殖，使肿瘤细胞的生存率下降，这种抑制作用在48h最明显，GABAB受体特异拮抗剂CGP3534

4、8可以拮抗GABA对肿瘤细胞增殖的抑制作用；加lnexinV-Pl染色结果显示GABA可以促使肿瘤细胞Hela，786一O，Bcap．37及SGC．7901凋亡明显增加，GABAB受体特异拮抗剂CGP35348可以拮抗GABA对肿瘤细胞凋亡的促进作用；WestemBlot检测表明GABA可以激活ⅢK，使p．ⅢK蛋白表达升高，GABAB受体特异拮抗剂CGP35348可以拮抗由GABA引起的心K的激活；免疫共沉淀和免疫印迹检测显示，GABA可以引起GABABR、p．a仃estin、ⅢK之间的相互结合增加，GABAB受体特异拮抗剂CGP35348可以拮抗由GABA引起的G

5、ABABR·B．an．estin·ⅢK信号模块的组装。结论GABA可以抑制肿瘤细胞的增殖且促进其凋亡：GABA对肿瘤细胞的徐州医学院硕士学位论文_—————————————————————————————————————————————————一作用与ⅢK的激活有关；GABA对肿瘤细胞的作用与其引起的GABABR．p—arre池．卟Ⅸ信号模块的组装进而激活ⅢK信号通路密切相关。关键词：GABA；增殖；凋亡；ⅢK；肿瘤4徐州医学院硕士学位论文Theef．fectof丫一aminobutyricacidontheprolifemtionandapoptosisofthe

6、humantumorceUsAbstractObjec晰eToinVestigatetllee虢ctofY-锄inobut)rricaCid(GABA)on廿1eproliferation锄dap咄Sisoflmmantumorcells，andexplorethemoleclllarmechaIlismofiII仃acellularp抽ways．MethodsTheexpressionof(认BABrecemorintumorcellsmela，786一O，Bc印一37，SGC一7901)、VaSdetectedbyWbst唧Blotandi衄吼ocytochem

7、is时analysis．7Ikprolif．erationoftulnorcellswaSdetennincdbyCCK-8．1k印optosisoftuInorcellsw勰detemlinedby抵inVandPropidiumIodide(PI)StainiI培Assay．7nlee虢ctofGABAontIleexpressionofp一扑Ⅸ、^，aSdetectedbyW-eStemBlot．Wrealsoexploremee胝tofGABAonmesi印almo硼eGABABR．p-撇s缸·ⅢKbyWrestemBlotandimmunI叩recipit

8、ation．Results7nleGABABrec印torsubunitsweree)【pressioninHel鸟786一O，Bc印-37锄dSGC一790lcells．Compared晰tllthecon廿0l黟oups，GABAcaninIlibittlleprolif-erationoftumorcellssi驴ificantly，aIldtllesurVivalrateoftumorcellswasdecreaSedobViouSlyat48h．AIldGABAcanalsomarkedlyincreasetlleapoptosis，whereasGA